Development of packaging cells for production of BAC-derived recombinant Epstein-Barr virus

开发用于生产 BAC 衍生重组 Epstein-Barr 病毒的包装细胞

• 批准号: 18590445
• 负责人: KANDA Teru
• 金额: $ 2.59万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18590445/
• 关键词: Epstein-Barr virus; bacterial artificial chromosome; packaging system; 293 cells; B-lymphocyte transformation

Bacterial artificial chromosome (BAC) system is useful for engineering the genome of Epstein-Barr virus (EBV) genome in E. coll. We aimed to establish a packaging system to produce recombinant EBVs derived from the BAC clone. We tested two cell lines harboring helper viruses of EBV for their usefulness as packaging cells; (1)P3HR-1 cells (derived from human Burkitt's lymphoma cells) and (2)B95-8 cells and their derivatives (derived from marmoset lymphoblastoid cell lines). However, the results revealed that we could not avoid the recombination between the helper virus DNA and the BAC clone DNA. Therefore, in order to get pure recombinant EBVs, we switched our strategy to establish a system that is free from helper virus. For this purpose, we cloned the full length genome of B95-8 strain EBV, and introduced the BAC clone DNA into human 293 cells. This strategy enabled us to efficiently establish recombinant virus-producing cells. The resultant recombinant EBVs are superior to previously-reported 293-derived recombinant EBVs in their efficiency to transform B-lymphocyte as well as in their ability to express transgenes. These results demonstrate that the combinational usage of the BAC clone of B95-8 strain EBV and 293 cells is an efficient way to produce high-titer pure recombinant EBVs.

细菌人工染色体（BAC）系统可用于改造大肠杆菌中的 Epstein-Barr 病毒（EBV）基因组。我们的目标是建立一个包装系统来生产源自 BAC 克隆的重组 EBV。我们测试了两种携带 EBV 辅助病毒的细胞系作为包装细胞的用途； (1)P3HR-1 细胞（源自人伯基特淋巴瘤细胞）和 (2)B95-8 细胞及其衍生物（源自狨猴类淋巴母细胞系）。然而，结果表明我们无法避免辅助病毒DNA与BAC克隆DNA之间的重组。因此，为了获得纯重组EBV，我们改变了策略，建立了一个不含辅助病毒的系统。为此，我们克隆了 B95-8 EBV 株的全长基因组，并将 BAC 克隆 DNA 导入人 293 细胞中。这一策略使我们能够有效地建立重组病毒产生细胞。所得重组 EBV 在转化 B 淋巴细胞的效率以及表达转基因的能力方面优于先前报道的 293 衍生重组 EBV。这些结果表明，B95-8株EBV的BAC克隆和293细胞的组合使用是生产高滴度纯重组EBV的有效方法。

项目成果

Epstein-Barr Virus (EBV)-encoded RNA 2 (EBER2) but not EBERlplays a critical role in EBV-induced B-cell growth transformation.

Epstein-Barr病毒(EBV)编码的RNA 2 (EBER2)而非EBER1在EBV诱导的B细胞生长转化中发挥关键作用。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Virology 81(20)
• 作者: 今西 健一;ほか;Teru Kanda;Yi Wu;Teru Kanda;Yi Wu
• 通讯作者: Yi Wu

EBV潜伏感染複製起点配列内のリピート配列の多寡とBリンパ球トランスフォーメーション活性の関連

EBV潜伏感染复制起点序列中重复序列丰度与B淋巴细胞转化活性的关系

• 发表时间: 2007
• 作者: 今西 健一;ほか;Teru Kanda;Yi Wu;Teru Kanda;Yi Wu;Yi Wu;Tern Kanda;神田 輝;Teru Kanda;神田 輝
• 通讯作者: 神田 輝

「研究成果報告書概要(和文)」より

摘自《研究结果报告摘要（日文）》

• 发表时间: 2005
• 作者: Kawauchi;et. al.;Nishimura et al.;Dezawa et al.;Yoshizawa et al.;星野 幹雄;星野 幹雄
• 通讯作者: 星野 幹雄

The number of repeat sequence within the EBV latent origin of replication affects B-cell transformation efficiency

EBV 潜在复制起点内重复序列的数量影响 B 细胞转化效率

• 发表时间: 2007
• 作者: 今西 健一;ほか;Teru Kanda;Yi Wu;Teru Kanda;Yi Wu;Yi Wu;Tern Kanda;神田 輝;Teru Kanda
• 通讯作者: Teru Kanda

EBV潜伏感染複製起点配列内のリビート配列の多寡とBリンパ球トランスフォーメーション活性の関連

EBV潜伏感染复制起始序列中重拍序列丰度与B淋巴细胞转化活性的关系

• 发表时间: 2007
• 作者: 今西 健一;ほか;Teru Kanda;Yi Wu;Teru Kanda;Yi Wu;Yi Wu;Tern Kanda;神田 輝
• 通讯作者: 神田 輝