ヒトWilms腫瘍細胞株を用いたWilms腫瘍抑制遺伝子(WT-1)の機能解析

使用人 Wilms 肿瘤细胞系进行 Wilms 肿瘤抑制基因 (WT-1) 的功能分析

基本信息

批准号：
06770165
负责人：
長嶋洋治
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770165/
关键词：
Wilms腫瘍 WT-1遺伝子ヌードマウス移植株遺伝子移入

项目摘要

(目的)本研究では、当初、1.無虹彩症患児に発生したWilms腫瘍より樹立したヌードマウス移植腫瘍株KCMC-WT-1よりin vitro培養細胞株を樹立し、性格付けを行う、2.1で樹立された培養細胞株に、Wilms腫瘍抑制遺伝子(候補)WT-1 cDNAを組み込んだ発現プラスミドを移入し、細胞の性格の変化を検討し、WT-1遺伝子の機能解析を行う、ことを目的とした。(方法および結果)1.KCMC-WT-1の継代時毎に(現在継代21代)、培養細胞株を樹立を試みた。しかし、組織片植え込み法、酵素消化法のいずれにおいても、マウス線維芽細胞の増殖により腫瘍細胞の安定した増殖は得られなかった。現在、培養条件を検討中であるが、無血清培地、低カルシウム培地、浸透圧を変化させた培地などを用いた培養を試みている。2.KCMC-WT-1より細胞株の樹立が困難であったため、我々が樹立したラットWilms腫瘍細胞株ENU-T-1(Nagashima et al.,1989; Sumino et al.,1992, Nagashima et al.,1992)をrecipient細胞として用いることを検討した。本細胞株はノザン法にてラットWT-1遺伝子転写産物を欠いており、本実験に適している。 3.WT-1遺伝子の発現プラスミドとしてpCAGGS-neo-WT1(秋山徹博士より供与)を用いENU-T-1に、リポフェクチン法による遺伝子移入を行った。現在、得られたクローンの性格(増殖性変化、ヌードマウス移植性の変化など)を検討している。(付記)KCMC-WT-1は継代中に、組織学的に、器官様成分が失われ、腎芽細胞成分によって構成されるようになった。このことから、細胞株の樹立がより容易になると期待される。

（目的）在本研究中，我们最初的目的是： 1. 建立并表征裸鼠移植肿瘤系 KCMC-WT-1 的体外培养细胞系，该细胞系是从无虹膜儿童的肾母细胞瘤中建立的； 2.1.目的是将含有Wilms抑癌基因（候选）WT-1 cDNA的表达质粒导入建立的培养细胞系中，检查细胞特性的变化，并对WT-1基因进行功能分析等。（方法和结果） 1. 我们尝试在KCMC-WT-1的每代（目前为第21代）建立培养细胞系。然而，由于小鼠成纤维细胞的增殖，组织碎片植入法和酶消化法均未导致肿瘤细胞稳定增殖。我们目前正在考虑培养条件，并尝试使用无血清培养基、低钙培养基和不同渗透压的培养基进行培养。 2.由于建立细胞系比KCMC-WT-1更困难，我们建立了大鼠Wilms肿瘤细胞系ENU-T-1(Nagashima et al., 1989; Sumino et al., 1992, Nagashima et al. ., 1992) 作为受体细胞。根据Northern 方法，该细胞系缺乏大鼠WT-1 基因转录本，适合本实验。 3.使用pCAGGS-neo-WT1(秋山彻博士捐赠)作为WT-1基因的表达质粒，通过脂质转染法将基因转入ENU-T-1。我们目前正在检查获得的克隆的特征（增殖的变化、裸鼠移植性的变化等）。（补充说明）在传代过程中，KCMC-WT-1在组织学上失去了器官样成分，并变成由肾母细胞成分组成。预计这将使细胞系的建立变得更容易。