血管内皮細胞における機械受容チャネルの研究

血管内皮细胞机械敏感通道的研究

• 批准号: 06770029
• 负责人: 成瀬 恵治
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770029/
• 关键词: 機械受容チャネル; 機械刺激; 血管内皮細胞; パッチクランプ法; 共焦点レーザー顕微鏡

本研究によって下記の結果を得た。1・低浸透圧による機械刺激低浸透圧処理による機械刺激を期待する場合、細胞膜伸展の度合いを評価しなければならない。接着細胞において体積増加による細胞膜の伸展の度合いを定量するために膜に蛍光色素を取り込ませ標識しリアルタイム共焦点レーザー顕微鏡を用いて縦断層面の経時的変化(z-t)の観察をした。その結果、低浸透圧刺激による膜伸展の時間経過を定量的に測定することができた。また従来、浮遊細胞系で報告されている調節性体積減少を確認することができた。2・シリコン膜による機械刺激従来の方式では伸展刺激時に焦点面がずれ、振動が大きい等のデメリットがあり、顕微鏡観察・電気生理学的手法は困難であった。本研究では従来法に改良を加え伸展時に焦点面がずれたり振動が少ない装置を開発した。現在、1・2の方法を駆使して定量的に機械刺激を与え機械受容チャネルを活性化し、生じる電気生理学的現象をパッチクランプ法にて記録している。

本研究获得以下结果。 1. 低渗透压引起的机械刺激 当预期低渗透压处理引起机械刺激时，必须评估细胞膜拉伸的程度。为了量化由于贴壁细胞体积增加而导致的细胞膜延伸程度，我们将荧光染料掺入膜中并对其进行标记，并使用实时共焦激光显微镜观察纵向切片随时间（z-t）的变化。因此，我们能够定量测量由于低渗透刺激而导致的膜延伸的时间过程。此外，我们能够确认先前在悬浮细胞系统中报道的可调节体积减少。 2.使用硅膜的机械刺激传统方法存在诸如拉伸刺激和大振动期间焦平面偏移等缺点，使得显微观察和电生理方法变得困难。在这项研究中，我们改进了传统方法，开发了一种焦平面偏移较小、拉伸过程中振动较小的装置。目前，我们使用方法1和方法2定量施加机械刺激来激活机械感受通道，并使用膜片钳方法记录由此产生的电生理现象。

项目成果

M.Sokabe.et al: "Stretch activated ion channels:Macroscopic vs.microscopic responses." Progr.Cell Res.(in press). (1995)

M.Sokabe.et al：“拉伸激活的离子通道：宏观反应与微观反应。”