サケ科魚類の生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子の発現調節機構

鲑鱼促性腺激素释放激素基因表达的调控机制

基本信息

批准号：
06740614
负责人：
安東宏徳
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06740614/
关键词：
生殖腺刺激ホルモン放出ホルモンサクラマス GnRH 遺伝子発現繁殖行動

项目摘要

脊椎動物における生殖機能のもっとも上位の制御因子である生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン(GnRH)の遺伝子発現の調節機構を解析することによって、動物の本能行動の一つである繁殖行動の発現メカニズムを明らかにすることができるのではないかという考えのもとに、昨年度より、サケ科魚類を材料として解析をスタートした。本年度は、次の2つの目標を立てて解析を行った:1.サクラマスのGnRH遺伝子の構造を明らかにする、2.環境要因によるGnRH遺伝子の発現の変動を明らかにする。本年度の研究成果として、この2つの目標に対応して、以下のような研究結果が得られた。1.サクラマスのGnRH遺伝子をクローニングするために、サクラマスの遺伝子ライブラリーを作成した。サクラマスのI型GnRHcDNAとヒメマスのII型GnRHcDNAをプローブとしてスクリーニングした結果、I型GnRHcDNAに陽性なクローンを4個とII型GnRHcDNAに陽性なクローンを1個得ることができた。これらのクローンのサザン分析の結果、I型とII型の両GnRH遺伝子をクローニングすることができたと考えられ、現在その塩基配列の解析を行っている。今後、エクソン、イントロン構造を決定し、発現制御に関わる領域の解析を行いたいと考えている。2.自然状態におけるサクラマスの成長、成熟にともなったGnRH遺伝子の発現の変動を明らかにするために、北海道立水酸孵化場の協力を得て、稚魚から成熟にいたる各ステージのサクラマスの脳、血液などを経時的に11回にわたって採集した。この採集は来年度秋に終了するので、その後、膜上、あるいは切片上のハイブリダイゼーション法を用いてGnRHのcDNAの定量的解析を行いたいと考えている。

通过分析脊椎动物生殖功能最重要的调节因子促性腺激素释放激素（GnRH）的基因表达调控机制，我们阐明了动物本能行为之一的生殖行为的机制。考虑到可能做到这一点，我们去年开始使用鲑鱼作为材料进行分析。今年，我们进行了以下两个目标的分析：1. 阐明樱桃鲑鱼中 GnRH 基因的结构；2. 阐明环境因素导致的 GnRH 基因表达的变化。今年的研究结果是，针对这两个目标，获得了以下研究成果。 1、为了克隆樱桃鲑鱼的GnRH基因，建立了樱桃鲑鱼基因库。使用樱桃鲑鱼的I型GnRH cDNA和日本红鳟鱼的II型GnRH cDNA作为探针进行筛选，结果获得了4个I型GnRH cDNA阳性的克隆和1个II型GnRH cDNA阳性的克隆。对这些克隆进行 Southern 分析后，我们相信我们能够克隆 I 型和 II 型 GnRH 基因，目前我们正在分析它们的核苷酸序列。未来，我们希望确定外显子和内含子的结构，并分析参与表达调控的区域。 2. 为了明确樱桃鲑鱼在自然条件下生长和成熟过程中GnRH基因表达的变化，我们与北海道盐酸孵化场合作，对樱桃鲑鱼从鱼苗到成熟各个阶段的大脑进行了检查。随着时间的推移，其他样本被收集了 11 次。该收集将于明年秋季完成，之后我们希望利用膜或切片的杂交方法对 GnRH cDNA 进行定量分析。