コムギ配偶子致死遺伝子の染色体切断機構の解明:切断点DNA配列の解析

阐明小麦配子致死基因的染色体断裂机制：断点DNA序列分析

• 批准号: 06740569
• 负责人: 辻本 嘉
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06740569/
• 关键词: コムギ; 配偶子致死遺伝子; 染色体欠失系統; 染色体異常; rDNA

1.パンコムギはゲノムサイズが大きいので、まず、ゲノムから特定箇所の配列をPCRによって確実に増幅させる条件を検討した。貯蔵蛋白質グルテニン遺伝子を参考にプライマーを合成し、種々の条件でPCRを行った。その結果、A、BおよびDゲノムの即知の遺伝子部位を増幅する条件を設定することができた。この条件で、以下の研究を進めた。2.コムギおよびトマトのrDNAの塩基配列に基づいて、この遺伝子の平均450bpにひとつのプライマーを両方向に合成した。まず、rDNAプライマー単独でPCRを行ったが、3プライマーで増幅がみられ、特例領域に逆位をもつrDNA配列がゲノム内に存在することが分かった。3.細胞学的にrDNA領域で切断が起こっていると思われる8種類の欠失系統のゲノムDNAを鋳型としテロメアおよび10種のrDNAプライマーの組で、PCRを行ったところ、7組合せにおいて、欠失のない正常系統では出現しないDNA断片の増幅が見られた。このうち、増幅な顕著な2断片を、プラスミドベクターにクローン化した。5.現在、この塩基配列を決定し、切断点のDNA配列の構造を調べているところである。

1. 面包小麦的基因组很大，因此我们首先研究了通过 PCR 可靠地扩增基因组中特定序列的条件。参考储存蛋白麦谷蛋白基因合成引物，并在各种条件下进行PCR。结果，我们能够设定条件来扩增 A、B 和 D 基因组中的已知基因位点。在此条件下，我们进行了以下研究。 2.根据小麦和番茄的rDNA核苷酸序列，双向合成该基因的平均450bp的引物。首先，仅使用rDNA引物进行PCR，但用3个引物观察到扩增，表明基因组中存在特殊区域倒置的rDNA序列。 3. 以细胞学上认为 rDNA 区域被切割的 8 种缺失系的基因组 DNA 为模板和端粒，以及 10 种 rDNA 引物组，以 7 种组合进行 PCR 时，扩增出以下 DNA 片段：在未观察到缺失的正常菌株中不出现。其中，两个显着扩增的片段被克隆到质粒载体中。 5.我们目前正在确定该碱基序列并研究断裂点处DNA序列的结构。