SCIDマウスを用いたヒト型モノクローナル抗体作製法の開発及びその臨床応用の研究

SCID小鼠人单克隆抗体生产方法的开发及临床应用研究

• 批准号: 06771360
• 负责人: 福地 剛
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771360/
• 关键词: ヒト型モノクローナル抗体; 子宮体癌; Lewis^b型糖鎖; SCIDマウス

1.SCID-huマウスにおける、ヒト型抗体の作製SCIDマウスにヒト末梢血リンパ球を移植したSCID-huマウスを用いて、ヒト型モノクローナル抗体の作製を試みた。今回の研究目的を子宮体癌に対する特異的なヒト型抗体の作製としたため、当初は体癌由来培養細胞株を抗原として、SCID-huマウスに免疫した。抗原の投与経路、投与スケジュール、細胞融合のタイミング、方法などについて検討を重ね、SCID-huマウスの系におけるヒト型モノクローナル抗体の作製に成功した。当研究室にて樹立したヒト子宮体癌由来培養細胞株SNG-S及びその細胞膜分画lysateを免疫原とし、SCID-huマウスに免疫しマウス脾細胞とヒト、マウスヘテロミエローマ細胞とをPEGを用いて細胞融合した。その結果、高い効率でヒト型抗体を産生するハイブリドーマを樹立した。そのうち体癌細胞に反応する抗体産生株をスクリーニングし、最終的に4種のモノクローナル抗体を得たが、いずれも免疫組織化学的検索の結果、非特異的なものであった。2.ヒト型抗Lewis^b型糖鎖抗体の作製ここまでの検討の結果、ハイブリドーマの融合効率については再現性を持った良い成績が得られるようになったが、最終的に得られた抗体は特異性に乏しく、その対策として免疫原により純粋な物質を用いることとした。過去当研究室で樹立したマウス型抗子宮体癌モノクローナル抗体MSN-1は体癌と高率に反応することが確認されており、その認識抗体は主にLewis^b型糖鎖である。そこで、Lewis^b型糖鎖を糖脂質の形にして免疫原とし、MSN-1をコントロールにアッセイを行い抗Lewis^b型糖鎖抗体を作製することとした。そこで今回、免疫原が変わったため免疫のスケジュールを改めて検討する必要があり、現在検討中である。

1.在SCID-hu小鼠中制备人源化抗体我们尝试使用SCID-hu小鼠来制备人源化单克隆抗体，其中将人外周血淋巴细胞移植到SCID-hu小鼠中。由于这项研究的目的是创建一种针对子宫内膜癌的人源化抗体，因此最初用源自子宫内膜癌的培养细胞系作为抗原对 SCID-hu 小鼠进行免疫。经过仔细考虑抗原施用途径、施用时间表、时间和细胞融合方法，我们成功地在 SCID-hu 小鼠系统中产生了人单克隆抗体。以本实验室建立的人子宫内膜癌来源的培养细胞系SNG-S及其细胞膜裂解物作为免疫原免疫SCID-hu小鼠，并用PEG细胞融合免疫小鼠脾细胞和人和小鼠异源骨髓瘤细胞。是使用执行的结果，建立了高效产生人类抗体的杂交瘤。其中，我们筛选了与体细胞癌细胞反应的抗体产生菌株，最终获得了四种类型的单克隆抗体，但免疫组化搜索结果发现它们均具有非特异性。 2.人抗Lewis^b型糖链抗体的制备迄今为止的研究结果，关于杂交瘤的融合效率，我们已经能够获得具有重现性的良好结果，但是所获得的抗体的最终结果是特异性差，作为解决这个问题的对策，我们决定使用更纯的物质作为免疫原。已证实我们实验室过去建立的小鼠抗子宫内膜癌单克隆抗体MSN-1与癌症的反应率很高，其识别抗体主要识别Lewis^b型糖链。因此，我们决定使用Lewis^b型聚糖作为糖脂形式的免疫原来制备抗Lewis^b型聚糖抗体，并使用MSN-1作为对照进行测定。因此，由于免疫原发生了变化，需要重新考虑免疫方案，目前正在考虑中。