ヒト由来肝癌培養細胞によるTSP(Thrombo spondin)の発現様式

培养的人肝癌细胞 TSP（Thrombo spondin）的表达模式

• 批准号: 06770944
• 负责人: 内田 信治
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770944/
• 关键词: 肝癌培養細胞; トロンボスポンジン; 発現; 免疫生化学

トロンボスポンジン(TSP)は、癌転移に関与するとされる。主として血小板由来の糖蛋白で、細胞接着能、凝固促進能、細胞遊走能等を有しており、特に乳腺癌、偏平上皮癌等に多量に分泌されることが報告されている。しかし原発性肝癌に関するTSPの研究の報告はまだみられない。そこで我々は、肝癌細胞におけるTSPの発現状態および性状を検討する目的で、ヒト肝癌培養細胞株(KIM-1)を用いて免疫生化学的に検討した。2×10^4個のK1M-1細胞を、スライドガラス上で無血清下に3日間培養し、抗TSP抗体を用いて、免疫化学染色法(ABC法)、免疫蛍光染色法、共焦点レーザー走査顕微鏡解析法によりTSPの発現状態を検討した。さらにTCAによる濃縮培養上清と培養細胞ホモジネート液、またコントロールとしてヒト血小板由来TSPを用いてWesterc blotting法を行い、各々におけるTSPの有無を比較検討した。その結果、ABC法、免疫蛍光染色法では、すべての細胞においてTSP染色は陽性であった。また、共焦点レーザー走査顕微鏡解析では、核周囲の細胞質に顕粒状にTSPの発現を認めた。Wes-tern blotting法では、培養細胞ホモジネート液でヒト血小板由来TSPと同様にMW150,000のTSPを確認したが、培養上清とその濃度液中には認めなかった。これらの結果よりKIM-1細胞はTSP産生細胞であることが示され、その細胞内局在は核周囲の細胞質であることが強く示唆された。そして、KIM-1細胞内のTSPはヒト血小板由来TSPと同様の物質であると考えられた。

据说血小板反应蛋白（TSP）与癌症转移有关。它是主要来源于血小板的糖蛋白，具有细胞粘附能力、促凝能力、细胞迁移能力等，有报道大量分泌，尤其在乳腺癌、鳞状细胞癌等中。但目前尚未见TSP治疗原发性肝癌的研究报道。因此，为了检查肝癌细胞中TSP的表达状态和性质，我们使用培养的人肝癌细胞系（KIM-1）进行了免疫生化研究。 2 x 10^4 K1M-1 细胞在无血清的载玻片上培养 3 天，使用抗 TSP 抗体、免疫化学染色（ABC 法）、免疫荧光染色、共聚焦激光使用 TSP 表达状态进行研究扫描显微镜分析。此外，使用TCA浓缩的培养上清液、培养细胞匀浆和作为对照的人血小板来源的TSP进行Westerc印迹，并且比较各自中TSP的存在或不存在。结果，采用ABC法和免疫荧光染色法，所有细胞的TSP染色均呈阳性。此外，共聚焦激光扫描显微镜分析揭示了细胞核周围细胞质中 TSP 的表达。使用Western-tern blotting方法，在培养的细胞匀浆中确认了分子量为150,000的TSP，与人血小板来源的TSP相似，但在培养上清或其浓缩液中未检测到TSP。这些结果表明KIM-1细胞是TSP产生细胞，并强烈表明细胞内定位在核周细胞质中。此外，KIM-1细胞中的TSP被认为是与人血小板衍生的TSP类似的物质。