頭頚部癌におけるコネキシンの発現の検討と臨床応用に関する研究

头颈癌中连接蛋白的表达及临床应用研究

基本信息

批准号：
17791213
负责人：
小澤宏之
金额：
$ 2.11万
依托单位：
独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791213/
关键词：
頭頸部癌コネキシン免疫染色細胞増殖細胞培養

项目摘要

コネキシン(Cx)はギャップジャンクション蛋白であり、いままでに20種類のファミリー蛋白が確認され、生体内の組織ごとに発現しているCxの種類が異なる。近年は様々な腫瘍細胞へCx遺伝子を導入することで増殖が抑制されることが報告されている。今回我々は、頭頸部癌組織のCx26およびCx30の発現について免疫染色法で検討を行った。癌周囲の正常粘膜ではCx26は粘膜の全層で発現が認められた。Cx30は基底層では殆んど発現がなく有棘層に強い発現を認めた。癌組織と正常粘膜とを比較すると、Cx26では発現量の差は認めなかったが、Cx30では癌組織でのCx30の発現が低下していた。癌細胞内のコネキシンの分布は、Cx26では細胞質に発現した。Cx30は細胞膜に発現する傾向があったが、特に舌癌ではCx30を細胞質に強く発現する細胞が散在していた。続いて免疫染色の結果をふまえてCx30を強制発現するプラスミドベクター(Full)を作成した。細胞内での局在を判定するためGFP蛋白を共発現するように構築した。コントロールベクターとしてGFPのみ発現するベクター(EM)、Cx30 deletion of C-terminal(DelC),Cx30 C-terminal(CT)を発現するベクターを作成した。各々のプラスミドベクターを頭頸部癌細胞株であるHSC-4に遺伝子導入し、強制発現された蛋白の局在を検討した。EMを導入した細胞株では核が凝縮し細胞全体に強く発現したが、Fullでは主に細胞膜に局在し、DelCでは核周囲〜細胞質に発現した。CTでは細胞質に淡く発現する細胞と核凝縮を伴い細胞全体に強く発現する細胞が混在した。増殖率については細胞周期関連蛋白であるKi-67(MIB-1)との二重染色を行いMIB-1 indexで評価したところEMと比較しFullおよびDelCで増殖能が亢進する傾向があった。

连接蛋白（CX）是一种间隙连接蛋白，到目前为止已经确认了20种家族蛋白，并且在体内每个组织中表达的CX类型都不同。近年来，据报道，将CX基因引入各种肿瘤细胞会抑制生长。在这项研究中，我们使用免疫染色研究了头部和颈部癌组织中CX26和CX30的表达。在周围癌症的正常粘膜中，观察到CX26在整个粘膜中表达。 CX30在基础层中几乎不表达，并在脊柱中强烈表达。当比较癌组织与正常粘膜时，CX26没有观察到表达水平的差异，但是癌症组织中CX30的CX30表达降低了。在CX26的细胞质中表达了癌细胞中连接素的分布。 CX30倾向于在细胞膜中表达，但尤其是在舌癌中，强烈表达CX30的细胞散布在细胞质中。接下来，根据免疫染色的结果，制备了强制表达CX30的质粒载体（完整）。为了确定细胞内定位，构建了GFP蛋白以共表达GFP蛋白。作为对照载体，制备了仅表达GFP（EM），C末端（DELC）和CX30 C末端（CT）的矢量。将每个质粒载体转移到HSC-4，头颈癌细胞系中，并研究了被迫表达的蛋白质的定位。在与EM一起引入的细胞系中，将细胞核凝结并在整个细胞中强烈表达，但完全被整体地定位于细胞膜，在DELC中，它表达了核糖周核向细胞质表达。在CT中，在细胞质中轻轻表达的细胞和在整个细胞中强烈表达的细胞与核冷凝混合。用KI-67（MIB-1）（一种与细胞周期相关的蛋白质染色）对生长速率进行了双重染色，并使用MIB-1指数进行了评估，并且与EM相比，增殖能力充分和DELC具有增殖能力的趋势。