頭頚部癌におけるコネキシンの発現の検討と臨床応用に関する研究

头颈癌中连接蛋白的表达及临床应用研究

基本信息

批准号：
17791213
负责人：
小澤宏之
金额：
$ 2.11万
依托单位：
独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791213/
关键词：
頭頸部癌コネキシン免疫染色細胞増殖細胞培養

项目摘要

コネキシン(Cx)はギャップジャンクション蛋白であり、いままでに20種類のファミリー蛋白が確認され、生体内の組織ごとに発現しているCxの種類が異なる。近年は様々な腫瘍細胞へCx遺伝子を導入することで増殖が抑制されることが報告されている。今回我々は、頭頸部癌組織のCx26およびCx30の発現について免疫染色法で検討を行った。癌周囲の正常粘膜ではCx26は粘膜の全層で発現が認められた。Cx30は基底層では殆んど発現がなく有棘層に強い発現を認めた。癌組織と正常粘膜とを比較すると、Cx26では発現量の差は認めなかったが、Cx30では癌組織でのCx30の発現が低下していた。癌細胞内のコネキシンの分布は、Cx26では細胞質に発現した。Cx30は細胞膜に発現する傾向があったが、特に舌癌ではCx30を細胞質に強く発現する細胞が散在していた。続いて免疫染色の結果をふまえてCx30を強制発現するプラスミドベクター(Full)を作成した。細胞内での局在を判定するためGFP蛋白を共発現するように構築した。コントロールベクターとしてGFPのみ発現するベクター(EM)、Cx30 deletion of C-terminal(DelC),Cx30 C-terminal(CT)を発現するベクターを作成した。各々のプラスミドベクターを頭頸部癌細胞株であるHSC-4に遺伝子導入し、強制発現された蛋白の局在を検討した。EMを導入した細胞株では核が凝縮し細胞全体に強く発現したが、Fullでは主に細胞膜に局在し、DelCでは核周囲〜細胞質に発現した。CTでは細胞質に淡く発現する細胞と核凝縮を伴い細胞全体に強く発現する細胞が混在した。増殖率については細胞周期関連蛋白であるKi-67(MIB-1)との二重染色を行いMIB-1 indexで評価したところEMと比較しFullおよびDelCで増殖能が亢進する傾向があった。

连接蛋白（Cx）是间隙连接蛋白，目前已鉴定出20个家族蛋白，不同类型的Cx在体内不同组织中表达。近年来有报道称，通过向多种肿瘤细胞中导入Cx基因，可以抑制其增殖。在这里，我们使用免疫染色研究了头颈癌组织中 Cx26 和 Cx30 的表达。在癌症周围的正常粘膜中，Cx26在粘膜的所有层中表达。 Cx30在基底层中几乎不表达，而在棘层中强烈表达。比较癌组织和正常粘膜，癌组织中Cx26的表达水平无差异，但Cx30的表达量降低。关于连接蛋白在癌细胞内的分布，Cx26在细胞质中表达。 Cx30倾向于在细胞膜中表达，但也有散在的细胞在细胞质中强烈表达Cx30，尤其是在舌癌中。接下来，基于免疫染色的结果，制作用于强制表达Cx30的质粒载体(Full)。它被构建为共表达 GFP 蛋白以确定细胞内定位。作为对照载体，创建了仅表达 GFP (EM)、Cx30 C 末端缺失 (DelC) 和 Cx30 C 末端 (CT) 的载体。我们将每个质粒载体引入头颈癌细胞系 HSC-4，并检查强制表达蛋白质的定位。在引入EM的细胞系中，细胞核浓缩，并且在整个细胞中强烈表达，而在Full中，它主要位于细胞膜上，而在DelC中，它在核周至细胞质中表达。 CT显示细胞质中微弱表达的细胞和整个细胞内强烈表达且核浓缩的细胞的混合物。关于增殖率，通过细胞周期相关蛋白Ki-67（MIB-1）的双重染色以及使用MIB-1指数的评价可知，与Full和DelC相比，存在增殖率提高的倾向。到 EM 。