ヒト卵巣顆粒膜細胞におけるERK、Akt活性化の機序の解明

阐明人卵巢颗粒细胞 ERK 和 Akt 激活机制

• 批准号: 17791105
• 负责人: 平川 隆史
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791105/
• 关键词: 顆粒膜細胞; シグナル伝達; ゴナドトロピン受容体; 卵巣; 遺伝子導入

卵巣顆粒膜細胞にはゴナドトロピン受容体が発現しており、下垂体から分泌されるFSH, LHといったゴナドトロピンに結合することにより細胞内へシグナルを伝達する。その結果、卵胞発育や排卵、黄体機能維持といった卵巣の主な機能が制御されていると考えられている。顆粒膜細胞におけるシグナル伝達経路の解析をするにあたり、細胞の入手が容易であるラット初代培養系での研究が先行していた。一方、ヒト細胞においては実験モデルの設定が難しいことから検討が進んでいないのが現状である。そこで今回われわれはヒト顆粒膜細胞腫由来の細胞株であるKGN細胞にFSH受容体を一過性遺伝子導入する実験系を確立し、この系を用いてヒト卵巣顆粒膜細胞におけるゴナドトロピン受容体活性化にともなうシグナル伝達経路の解析を試みた。KGN細胞にヒトFSH受容体をリポフェクション法で遺伝子導入することにより過剰発現を試みた。125-I FSHを用いた結合実験により内因性の受容体以外に遺伝子導入によって発現したと考えられた受容体が検出された。導入するDNA量などのリポフェクション法に遺伝子導入の条件を最適化し、もっとも効率が高い条件を設定した。遺伝子導入によって発現したFSH受容体に機能があるかを検討するため、FSHによって遺伝子導入細胞を刺激し、セカンドメッセンジャーである細胞内cAMP量を測定した。遺伝子導入細胞において細胞内cAMP産生が増加することが確認され、発現受容体が機能を有することが確認された。今後、この系を用いヒト顆粒膜細胞におけるERK, Aktといった細胞増殖やアポトーシス回避のシグナル伝達経路の詳細な解析を進める予定である。

卵巢颗粒细胞表达促性腺激素受体，并通过与垂体中分泌的FSH和LH等促性腺激素结合来传播信号。结果，人们认为卵巢的主要功能，例如卵泡发育，排卵和维持肠胃的肠胃函数。在分析颗粒细胞中的信号通路时，已经在细胞很容易获得的原代大鼠培养物中进行了研究。另一方面，目前的情况是很难在人类细胞中设置实验模型，因此没有进一步研究。因此，我们建立了一个实验系统，用于将FSH受体瞬时转导到KGN细胞，这是一种源自人颗粒细胞瘤的细胞系，并试图分析与人卵巢颗粒细胞中促分腺激素受体相关的信号传导途径。通过使用脂肪触摸将人FSH受体转染到KGN细胞中，尝试过表达。除了内源性受体外，使用125-i FSH检测到的受体的结合实验被认为是通过基因转移表达的。优化了基因转移的条件，以使用诸如要引入的DNA量之类的LiPofection方法，并设置了效率最高的条件。为了研究基因转移表达的FSH受体是否具有功能，用FSH刺激了转基因细胞，并测量了细胞内cAMP的数量，即第二使者。已经证实，细胞内cAMP的产生在转基因细胞中增加，并且表达受体具有功能。将来，我们将使用该系统对细胞增殖（例如ERK和AKT）的信号传导途径进行详细分析，并避免人颗粒细胞中的凋亡。

项目成果

排卵と内分泌攪乱物質

排卵和内分泌干扰物

• 发表时间: 2006
• 期刊: 産婦人科の実際 55・6
• 作者: Ohmichi M;Hayakawa J;et al.;Makoto Orisaka;Makoto Orisaka;Makoto Orisaka;Takashi Hirakawa;平川隆史
• 通讯作者: 平川隆史

Effect of 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-Dioxin on the Expression of Gonadotropin Receptors in Ovarian Granulosa Cells.

2,3,7,8-四氯二苯并-对二恶英对卵巢颗粒细胞促性腺激素受体表达的影响。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Immunology, Endocrine ＆ Metabolic Agents in Medicinal Chemistry 6(1)
• 作者: Kubota;Y.;Uemura H.;Nakaigawa N.;Ishiguro H.;Yao;M;Takashi Minegishi et al.;Takashi Hirakawa;Yumiko Abe;中村 和人;中村 和人;池田 禎智;Takashi Hirakawa et al.
• 通讯作者: Takashi Hirakawa et al.

内分泌攪乱物質と女性機能

内分泌干​​扰物与女性功能

• 发表时间: 2006
• 期刊: ホルモンと臨床 54・3
• 作者: Ohmichi M;Hayakawa J;et al.;Makoto Orisaka;Makoto Orisaka;Makoto Orisaka;Takashi Hirakawa;平川隆史;平川隆史
• 通讯作者: 平川隆史