着床前期胚における甲状腺刺激ホルモンの直接作用に関する検討

促甲状腺激素对着床前胚胎直接影响的研究

• 批准号: 17791101
• 负责人: 河村 和弘
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791101/
• 关键词: 甲状腺刺激ホルモン; 甲状腺刺激ホルモン受容体; 着床前期胚; 胚発育

1.TSHの受精卵への直接作用を検討するため、過排卵刺激を行ったマウスを交配させ、2細胞期胚を採取した。得られた2細胞期胚に各濃度のTSHを添加し受精卵の経時的発育を検討した。高濃度のTSHは受精卵の発育を抑制し、特に桑実胚期以降の発育を抑制した。胚盤胞での細胞数計測では、高濃度のTSHは内細胞塊、栄養膜外胚葉層の細胞数をともに減少させた。2.TSHによる受精卵の発育抑制にアポトーシスの発生が関与しているかどうか、caspase-3 assayおよびTUNEL法にて検討したところ、高濃度のTSHは胚盤胞のcaspase-3陽性細胞を増加させ、TUNEL染色細胞を増加させた。従って、高濃度のTSHは胚盤胞のアポトーシスを誘導することが明らかとなった。3.これらのTSHによる作用が受精卵に発現しているTSHRを介したものかどうかを検討するため、RNAiにより授精卵のTSHRの発現抑制を試みた。RNAiの導入はzygoteへのマイクロインジェクションによって行った。マウスTSHRに対する良い抗体が存在せず、RNAiによるTSHRの発現抑制の検証は、RNAレベルでの定量により行った。RNAiによりTSHR mRNAの発現量が抑制された胚盤胞では、高濃度TSHによる発現抑制・アポトーシス誘導効果が低下した。以上より、高濃度のTSHはその特異的受容体を介して、胚盤胞の発育抑制・アポトーシスの誘導作用を持つことが明らかとなった。

1. 为了检查 TSH 对受精卵的直接影响，我们将接受超排卵刺激的小鼠交配并收集 2 细胞期胚胎。将不同浓度的 TSH 添加到两细胞阶段胚胎中，并检查受精卵随时间的发育情况。高浓度的 TSH 抑制受精卵的发育，特别是在桑葚胚阶段之后。当计算囊胚中的细胞数量时，高浓度的 TSH 减少了内细胞团和滋养层外胚层的细胞数量。 2.我们通过caspase-3检测和TUNEL方法研究了细胞凋亡的发生是否与TSH抑制受精卵发育有关，发现高浓度的TSH增加了囊胚中caspase-3阳性细胞的数量。 TUNEL 染色细胞增多。因此，表明高浓度的TSH诱导囊胚细胞凋亡。 3.为了检查TSH的这些作用是否是由受精卵中表达的TSHR介导的，我们尝试使用RNAi抑制受精卵中TSHR的表达。通过显微注射将RNAi引入受精卵中。由于没有针对小鼠 TSHR 的良好抗体，我们通过在 RNA 水平上定量来验证 RNAi 对 TSHR 表达的抑制。在TSHR mRNA表达水平被RNAi抑制的囊胚中，高浓度TSH的表达抑制和细胞凋亡诱导作用减弱。由此可见，高浓度的TSH通过其特异性受体具有抑制囊胚生长、诱导细胞凋亡的作用。