軟骨器質蛋白の転写調節機序の解析

软骨蛋白转录调控机制分析

• 批准号: 17791006
• 负责人: 岡崎 賢
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17791006/
• 关键词: 軟骨; 遺伝子発現; 転写因子; 器質; 関節炎; MMP

軟骨細胞においてC/EBP発現増強に反応する遺伝子の検索軟骨細胞株C28I2に転写因子C/EBPを強制発現させ、MMPP1, 3, 13の遺伝子発現を半定量的RT-PCRにて解析したところ、MMP-13の発現増強が認められた。更に定量的real time PCRで解析したところ、やはり発現が増強していた。関節炎の関節軟骨内での発現解析関節リウマチ患者から得られた膝関節軟骨の標本において、免疫染色にてC/EBPとMMP-13はともに同じ領域に発現が認められた。軟骨細胞における転写調節解析軟骨細胞においてC/EBPの強制発現はMMP-13プロモーターの活性を用量依存的に増強させた。また、MMP-13プロモーター上に認められるC/EBPが結合可能な塩基配列をもった領域にC/EBPが実際に結合していることを、ChIPアッセイによって確認した。C/EBP発現アデノウイルスベクターの作成軟骨細胞はプラスミドベクターの導入効率が悪いことが問題である。そのため、より詳細な解析ができるようにアデノウイルスベクターを作成した。

搜索对软骨细胞中C/EBP表达的反应的基因被迫向软骨细胞库存C28i2表达转录因子C/EBP，并分析MMP1、3、13基因在语义RT-PCR中的表达。 13被认可。此外，当用定量实时PCR分析时，表达仍在增加。 C/EBP和MMP-13均在相同区域中识别出从关节炎软骨中关节炎患者获得的免疫染色标本中。在软骨细胞中，软骨细胞中C/EBP的强制表达增强了MMP-13启动子的活性。此外，CHIP测定法证实C/EBP实际上与可以组合MMP-13启动子上识别的C/EBP的区域结合。 C/EBP表达腺病毒载体创建的软骨细胞是质粒载体的引入效率很差的问题。因此，创建了腺病毒载体以进行更详细的分析。