GCKファミリーキナーゼ(MAPKKKキナーゼ)による細胞接着制御機構の解明

阐明 GCK 家族激酶（MAPKKK 激酶）的细胞粘附控制机制

基本信息

批准号：
17790215
负责人：
海川正人
金额：
$ 1.79万
依托单位：
University of the Ryukyus
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790215/
关键词：
Rap2 TNIK 細胞間接着細胞接着

项目摘要

ras癌遺伝子産物(Ras)の類縁分子低分子量G蛋白質Rap2に特異的標的蛋白質として3つのプロテインキナーゼ(HGK、TNIK、MINK)を単離・同定している。本研究ではTNIKの結合蛋白質および、リン酸化標的蛋白質の検索を行ない、TNIKの細胞接着装置に対する作用の解析を行った。これまでに、TNIKのGST融合蛋白質を固相化したアフィニティーカラムを用いてラット脳の膜抽出蛋白質画分からTNIK結合蛋白質を複数精製している。それらTNIK結合蛋白質のうちDrosophila rolling pebbles (rols)のラットホモログであるp190に着目し、TNIKとの関連を解析した。精製したp190の特異的抗体を用いて培養ケラチノサイト細胞におけるp190の局在を解析したところ、TNIKと同様に細胞間接着部位に集積している事が明らかになった。次いで、p190の遺伝子をクローニングして培養細胞に発現させたところ、導入したp190はTNIKと共に発現させるとリン酸化が亢進し、細胞間接着部位から細胞質分画に局在が変化することが明らかになった(投稿準備中)。また、組み換えレトロウイルスを用いて、TNIKの発現をテトラサイクリンにより誘導できるマウスの上皮系細胞株を樹立し細胞機能の解析を行った。TNIKの発現を誘導すると、細胞間接着が破壊され、コロニーが形成されなくなり、個々の細胞に葉状突起の形成がみられた。キナーゼ部位に変異を持つTNIKの発現を誘導した細胞では細胞間接着には変化はみられなかった。以上の事より、TNIKは細胞間接着の維持、解離といった細胞間接着の制御に関与しており、p190はTNIKによる制御を受け、それらの機能に関係している可能性が示唆された。

已经分离出三种蛋白激酶（HGK，TNIK，MINK）并将其鉴定为针对低分子量G蛋白Rap2的靶蛋白，这是Ras癌基因（RAS）的相关分子。在这项研究中，我们搜索了TNIK结合蛋白和磷酸化靶蛋白，并分析了TNIK对细胞粘附装置的影响。迄今为止，使用亲和度柱从大鼠脑的膜提取的蛋白质部分中纯化了多种TNIK结合蛋白，其中TNIK的GST融合蛋白被固定了。在这些TNIK结合蛋白中，P190是果蝇滚石（Rolls）的大鼠同源物（Rolls）的大鼠同源物，专注于与TNIK的关系。当使用纯化的特定抗体分析p190在培养的角质形成细胞中的定位时，揭示其在细胞间粘附位点积聚，类似于TNIK。接下来，当将P190基因克隆并在培养细胞中表达时，揭示了引入的P190与TNIK一起表达时，磷酸化增加，并从细胞间粘附部位的定位到细胞质分数（用于贴发的准备）。此外，使用重组逆转录病毒，我们建立了一种可以通过四环素和分析细胞功能诱导TNIK表达的上皮细胞系。在单个细胞中观察到诱导TNIK表达的破坏细胞细胞粘附，预防菌落并形成了叶胎过程。在激酶位点诱导TNIK表达的细胞没有显示细胞粘附的任何变化。从上面，建议TNIK参与控制细胞 - 细胞粘附，例如维持细胞 - 细胞粘附和解离，并且P190由TNIK控制，并且可能与其功能有关。