細胞膜成分を固相化した材料表面での造血細胞の体外増幅

固定化细胞膜成分材料表面造血细胞的体外扩增

• 批准号: 16750152
• 负责人: 野川 誠之
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Kanagawa Academy of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16750152/
• 关键词: 臍帯血; 造血幹細胞; ストロマ細胞; 体外増幅; 固定化サイトカイン; 光反応性高分子

本年度は、安全かつ再現性よく造血幹細胞を増幅させるシステムの開発を目指し、既知の造血増幅因子を材料基板上に再構築することで人工フィーダー細胞層として働くような培養基板を作製した。造血増幅因子としてnotch-ligandとSCFに注目し、イムノグロブリンのFc部位を導入したキメラタンパクであるdelta-1やSCF-Fc融合タンパクの細胞培養用シャーレへの固相化方法の検討を行った。これらの融合タンパクは、抗IgG(Fc)抗体を利用することで、高い配向性を保ちながら固相化することが可能であった。Delta-1依存性細胞株であるTMD-7はdelta-1を培養液に直接添加した場合は増殖効果がないのに対し、抗IgG(Fc)抗体を利用したdelta-1の固相化により濃度依存的な細胞増殖をすることがわかった。また、SCF依存性細胞株で同様の実験を行ったところ、SCF融合タンパクを培養液へ直接添加するよりも固相化したタンパクはより低濃度で細胞増幅させることができた。さらに、造血細胞培養のために最適な固定化用マトリックスの検討も行った。既に開発した合成高分子やゼラチンに光架橋性分子を導入した固定化材料に加え、造血幹細胞の増殖に効果があることが報告されているヘパリンやヒアルロン酸などの多糖に光架橋性分子を導入し、造血増幅因子の固定化を試みた。光架橋性分子を導入した多糖でDelta-1を固相化した培養基板では、TMD-7をdelta-1濃度依存的に細胞増殖させることができた。今後はヒト臍帯血から純化して回収したCD34陽性細胞を開発した基板上で培養する予定である。

今年，我们旨在开发一种安全和可重复的造血干细胞的系统，并通过在材料底物上重建已知的造血扩增因子，我们创建了一种培养底物，该培养基构造作为人工饲养细胞层。我们专注于Notch-Ligand和SCF作为造血扩增因素，我们研究了如何固定Delta-1，Delta-1是一种嵌合蛋白，它已将免疫球蛋白的FC位点以及SCF-FC融合蛋白引入了Petri菜肴中，以进行细胞培养。通过利用抗IGG（FC）抗体，这些融合蛋白能够在保持高方向的同时被固定。已经发现，当Delta-1依赖性细胞系TMD-7直接添加到培养基中时没有生长效应，但是发现通过使用抗IGG（FC）抗体固定Delta-1，细胞增殖以浓度依赖性依赖性方式发生。此外，使用SCF依赖性细胞系进行了类似的实验，并以低浓度固定的蛋白质的细胞扩增，而不是直接在培养基中添加SCF融合蛋白。此外，我们还研究了造血细胞培养的最佳固定基质。除了已经开发的合成聚合物和明胶外，还引入了可光叠链接分子，可将光叠链链接分子引入到诸如肝素和透明质酸之类的多糖中，据报道，这些分子可有效，可有效，可在造血细胞的增殖中添加造血细胞，并试图脱脂化肿瘤化疗法疗效。在用多糖固定的培养基底物中，引入了可光叠链接分子，可以以Delta-1浓度依赖性方式生长TMD-7。将来，从人类脐带血中回收的CD34阳性细胞将在发达的底物上培养。

项目成果

固定化培養基材-造血幹・前駆細胞の体外増幅を目指して-

固定化培养基质 - 旨在体外扩增造血干细胞和祖细胞 -

• 发表时间: 2004
• 期刊: 遺伝子医学MOOK1 再生医療へのブレイクスルー 1
• 作者: S.Murai;E.Fujiwara;H.Tada;M.Tomura;Y.Yamashita;野川誠之
• 通讯作者: 野川誠之