新しいアセチル転移酵素導入サルモネラ菌を用いた変異原性物質のDNA障害性の検出

使用引入新型乙酰转移酶的肠道沙门氏菌检测诱变物质的 DNA 损伤特性

基本信息

批准号：
05770290
负责人：
山崎浩史
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Osaka Prefectural Institute of Public Health
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770290/
关键词：
チトクロームP450 アセチル転移酵素ヒト個人差 6-アミノクリセン P4503A4 P4502B6 P4501A2

项目摘要

環境中に存在する発癌性ニトロクリセンの代謝関連化合物であり、極めて強いDNA傷害を引き起こす6-アミノクリセンの代謝的活性化機構を解明する目的で、ラットとヒトチトクロームP450(P450)酵素による活性化について以下の要領で研究を進めてきた。基質として、6-アミノクリセン(6-AC)とその代謝物トランス-1,2-ジヒドロ-1,2-ジヒドロキシ-6-アミノクリセン(6-AC-diol)を選び、酵素源としてラット肝と18例のヒト肝ミクロゾーム、精製P450酵素を含む再構成系及びヒトP450酵素をcDNA発現させたヒトリンパ芽球ミクロゾームを用いた。DNA損傷性は、大腸菌のSOS反応のumu遺伝子誘導を利用したサルモネラ菌TA1535/pSK1002と、この菌株にさらにアセチル転移酵素を導入したNM2009株を用い、菌体内に誘導されるbeta-ガラクトシダーゼ活性を指標に調べた。6-ACと6-AC-diolの活性化反応に関与するP450分子種を明らかにするために、P450特異抗体と阻害剤の影響を検討した。またヒト肝ミクロゾームによる代謝的活性化能とウエスタンブロッテイング法により求めた各P450分子種含有量並びに特異性のある既知の薬物酸化活性と相関性を調べた。またP450酵素に引き続いて反応に関与する酵素を予測するため、エポキシド水解酵素とその阻害剤並びにアセチル転移酵素阻害剤の添加効果を調べた。検討の結果、6-ACは、ラットP4502B1/2及びヒトP4502B6/3A4によってN-水酸化を受け、引き続きアセチル転移酵素によって代謝的活性化されるが、ラット及びヒトP4501A1/2により6-AC-diolを経て究極体ジオールエポキシドに変換されることが示唆された。以上の知見は、ヒト肝ミクロゾーム中のP450分子種の存在量比の違いが原因となって変異原性物質の代謝経路が異なることがあり、このことが環境化学物質の生体に対する影響発現における個体差の一因となることが予想された。

6-氨基是环境中存在的致癌硝基的代谢相关化合物，会造成极强的 DNA 损伤，为了阐明其代谢激活机制，我们研究了大鼠和人类细胞色素 P450 (P450) 酶的激活作用。一直在以下列方式对此主题进行研究。选择6-氨基(6-AC)及其代谢物反式-1,2-二氢-1,2-二羟基-6-氨基(6-AC-二醇)作为底物，并选择大鼠肝脏和酶源。使用18个人肝微粒体，一个含有纯化P450酶的重建系统，以及表达人P450酶cDNA的人淋巴母细胞微粒体。使用肠道沙门氏菌 TA1535/pSK1002 和 NM2009 菌株（其中在大肠杆菌的 SOS 反应中诱导umu基因，其中将乙酰转移酶引入到该菌株中，并在其中诱导β-半乳糖苷酶活性）测量 DNA 损伤。我用细菌细胞作为指标进行了研究。为了阐明参与 6-AC 和 6-AC-二醇活化反应的 P450 分子种类，我们研究了 P450 特异性抗体和抑制剂的作用。我们还研究了人肝微粒体的代谢激活能力、通过Western blotting测定的每种P450分子种类的含量与已知的特异性药物氧化活性之间的相关性。此外，为了预测P450酶之后参与反应的酶，我们研究了添加环氧化物水解酶、其抑制剂和乙酰转移酶抑制剂的效果。研究结果表明，6-AC在大鼠P4502B1/2和人P4502B6/3A4中发生N-羟基化，随后被乙酰转移酶代谢激活，但6-AC-在大鼠和人P4501A1/2中被代谢激活。它通过二醇转化为最终的二醇环氧化物。上述研究结果表明，由于人肝微粒体中P450分子种类的丰度比不同，致突变物质的代谢途径可能有所不同，这可能导致环境化学物质对生物体的影响存在个体差异。这将是造成差异的原因。