アルドステロン合成酵素遺伝子の発現制御

醛固酮合酶基因表达的调节

基本信息

批准号：
05770083
负责人：
河本健
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kochi Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

最近、我々はヒトのステロイド18水酸化酵素(P-450c18)とステロイド11beta水酸化酵素(P-45011beta)のcDNAをクローニングし、培養細胞で発現されてその酵素活性を明らかにした。これらはアミノ酸レベルでのホモロジーが93%と非常によくにており、酵素活性もかなりよくにていた。従って、アルドステロン合成の調節機構を解明するためには、これらの遺伝子の発現制御機構の違いや、これらが関係する代謝異常疾患について明らかにすることが重要である。P-450c18とP-45011beta遺伝子は、エクソンおよびイントロン部分で極めて高いホモロジーを持つのに対し、プロモーター領域では50%以下のホモロジーしか持たない。これらのプロモーター領域から一連の異なる長さの欠失変異体を作成してレポーター遺伝子の上流につなぎ、さまざまな細胞に入れてプロモーター活性について検討したところ、P-45011betaプロモーターは、副腎皮質由来のY-1細胞でのみcAMP依存的に発現し、一方、P-450c18プロモーターは、Y-1細胞でも非常に低い活性しか示さないことが判明した。現在、P-450c18の発現について、副腎皮質の初代培養細胞やアルドステロンを産生する細胞株であるNCI-H295を使用して検討中であるが、細胞の培養が難しい上に増殖速度も遅く、発現調節機構を調べるのはかなり困難な状況で、まだ良好な結果は得られていない。一方、P-450c18あるいはP-45011betaの欠損症ではないかと考えられる症例について、ゲノム遺伝子の解析を行ったところ、コルチコステロンメチルオキダーゼ(CMOI&II)欠損症ではP-450c18の遺伝子に、11beta水酸化酵素欠損症ではP-45011betaの遺伝子に変異があることが判明し、これらの欠損症の実態が明らかになった。

最近，我们克隆了人类固醇18-羟化酶（P-450c18）和类固醇11β-羟化酶（P-45011beta）的cDNA，并在培养细胞中表达它们，并揭示了它们的酶活性。它们在氨基酸水平上具有非常好的同源性，达到93%，并且它们的酶活性也相当好。因此，为了阐明醛固酮合成的调控机制，阐明这些基因表达控制机制的差异以及与其相关的代谢紊乱具有重要意义。 P-450c18和P-45011beta基因在外显子和内含子中具有极高的同源性，但在启动子区域中的同源性仅低于50%。从这些启动子区域创建一系列不同长度的缺失突变体，将其连接到报告基因的上游，并置于各种细胞中以检查启动子活性。结果发现，P-450c18启动子仅在-1细胞中表达。 cAMP依赖性方式，而P-450c18启动子即使在Y-1细胞中也表现出非常低的活性。目前，我们正在利用原代培养的肾上腺皮质细胞和产生醛固酮的细胞系NCI-H295来研究P-450c18的表达，研究其调节机制相当困难，尚未获得良好的结果。另一方面，当我们分析疑似患有P-450c18或P-45011β缺陷的病例的基因组基因时，我们发现皮质酮甲基氧化酶（CMOI＆II）缺陷在P-450c18基因中存在11β氢氧化物。氧化酶缺乏症的 P-45011beta 基因发生突变，这些缺陷的真正本质已经很清楚了。