好中球と細胞外マトリックスとの相互作用による角膜実質細胞の活性化の検討

检查由于中性粒细胞和细胞外基质之间的相互作用引起的角膜细胞的活化

• 批准号: 16791050
• 负责人: 福田 憲
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16791050/
• 关键词: 好中球; コラーゲン; 角膜実質細胞; サイトカイン; MMP; 3次元ゲル内培養; 角膜潰瘍

本年度は,昨年度の研究結果を基に,I型コラーゲンゲルとの相互作用により好中球より放出され,角膜実質細胞を活性化させる因子の検索を行った。1)好中球の培養上清に,副腎皮質ステロイドおよび漢方薬の抽出物であるトリプトライドを添加して培養し,角膜実質細胞のコラーゲン分解活性を測定した。またRNAを抽出し,real-time PCR法を用いてMMP mRNAの発現を検討した。ステロイド剤およびトリプトライドはいずれも濃度依存的に,好中球培養上清によって促進された角膜実質細胞によるコラーゲンゲル分解を抑制した。またこれらの薬剤は角膜実質細胞のMMP mRNAの発現を抑制した。2)好中球の培養上清にIL-1 receptor antagonistを添加して角膜実質細胞のコラーゲン分解活性を測定した。その結果,IL-1 receptor antagonistの濃度依存的にコラーゲン分解が抑制された。3)好中球を健常人の末梢血より分離し,単層培養あるいはコラーゲンゲル内において一定時間培養し,培養上清を回収し,Multi-Plexサスペンションアレイシステムで17種類のサイトカイン濃度を測定した。I型コラーゲンゲル内で培養した好中球では単層培養した好中球に比し,TNF-αやIL-1βなどの炎症性サイトカインの産生の促進が認められた。またIL-8などの種々のケモカインの産生促進も認められた。好中球によるIL-8の産生はゲル内のコラーゲンの濃度依存的に促進された。これらの結果より,好中球はコラーゲンゲルで培養すると活性化され,種々のサイトカインやケモカインを放出し,これらの因子が角膜実質細胞に作用してコラーゲンゲル分解を促進することが明らかとなった。またこれらの相互作用によるコラーゲンゲル分解は,ステロイド剤やトリプトライドなどの薬剤によって制御可能であることが明らかとなった。

今年，根据去年研究的结果，我们搜索了由于与I型胶原蛋白凝胶相互作用并激活角膜实质细胞而从中性粒细胞释放的因素。 1）将中性粒细胞培养上清液添加到皮质类固醇和中草药提取物中，并测量角膜基质细胞的胶原式活性。还提取了RNA，并使用实时PCR研究了MMP mRNA的表达。类固醇和色氨酸均以中性粒细胞培养上清液的浓度依赖性方式抑制了角膜实质细胞的胶原蛋白凝胶降解。这些药物还抑制了角膜实质细胞中MMP mRNA的表达。 2）通过将IL-1受体拮抗剂添加到嗜中性粒细胞培养物上清液中，测量了角膜实质细胞的胶原蛋白降解活性。结果，胶原蛋白降解以IL-1受体拮抗剂的浓度依赖性方式抑制。 3）中性粒细胞与健康个体的外周血分离，在单层或胶原蛋白凝胶中培养一段时间，并收集培养上清液，并使用多重质子悬浮式阵列阵列系统测量17种类型的细胞因子浓度。与中性粒细胞培养的单层相比，在I型胶原蛋白凝胶中培养的中性粒细胞促进了炎性细胞因子（例如TNF-α和IL-1β）的产生。还认识到产生了各种趋化因子，例如IL-8。中性粒细胞以凝胶中胶原蛋白的浓度依赖性方式加速了IL-8。这些结果表明，当在胶原蛋白凝胶上培养，释放各种细胞因子和趋化因子时，中性粒细胞被激活，这些因素作用于角膜实质并促进胶原蛋白凝胶降解。还已经揭示了由于这些相互作用而引起的胶原蛋白凝胶降解可以由类固醇和triptolides等药物控制。

项目成果

Dexamethasone inhibition of IL-1-induced collagen degradation by corneal fibroblasts in three-dimensional culture.

• DOI: 10.1167/iovs.04-0051
• 发表时间: 2004-09
• 期刊: Investigative ophthalmology & visual science
• 影响因子: 4.4
• 作者: Ying Lu;K. Fukuda;Yang Liu;N. Kumagai;T. Nishida

Inhibitory effect of triptolide on chemokine expression induced by proinflammatory cytokines in human corneal fibroblasts

• DOI: 10.1167/iovs.05-0010
• 发表时间: 2005-07-01
• 期刊: INVESTIGATIVE OPHTHALMOLOGY & VISUAL SCIENCE
• 影响因子: 4.4
• 作者: Lu, Y;Fukuda, K;Nishida, T
• 通讯作者: Nishida, T

Eyelid Fusion and Epithelial Differentiation at the Ocular Surface During Mouse Embryonic Development

• DOI: 10.1007/s10384-004-0189-1
• 发表时间: 2005-05
• 期刊: Japanese Journal of Ophthalmology
• 影响因子: 2.4
• 作者: Hui Zhang;Makiko Hara;Keisuke Seki;K. Fukuda;T. Nishida

アレルギー性結膜疾患における線維芽細胞の役割

成纤维细胞在过敏性结膜疾病中的作用

• 发表时间: 2005
• 期刊: 臨床眼科. 59・2
• 作者: Suzuki H;Akakura K;Ueda T;Mikami K;Tobe T;Komiya A;Ichikawa T;Igarashi T;Ito H.;福田憲
• 通讯作者: 福田憲

Inhibition of gap junction-mediated intercellular communication by TNF-α in cultured human corneal fibroblasts

• DOI: 10.1167/iovs.04-0840
• 发表时间: 2005-04-01
• 期刊: INVESTIGATIVE OPHTHALMOLOGY & VISUAL SCIENCE
• 影响因子: 4.4
• 作者: Hao, JL;Suzuki, K;Nishida, T
• 通讯作者: Nishida, T