移植片対固形腫瘍効果に関与するマイナー組織適合性抗原に対する液性免疫の検討

针对参与移植物抗实体瘤效应的次要组织相容性抗原的体液免疫检查

• 批准号: 16790537
• 负责人: 藤井 伸治
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790537/
• 关键词: マイナー組織適合性抗原; 移植片対固形腫瘍効果; 同種造血幹細胞移植; 移植片対宿主病

移植片対腫瘍効果(graft-versus-tumor : GVT effect)におけるマイナー組織適合性抗原(mHa)に対する液性免疫反応の関与を探索している。最近になりY染色体由来のmHaであるDBYに対する抗体反応がドナーリンパ球輸注後に増強すること、この液性免疫反応の有無と移植後再発が強く関連していることも報告されており、まず既知のmHa(HA-1,HA-2,HA-3,HA-8,HB-1,DBY,UTY,BCL2A1)に対する抗体反応の有無のスクリーニングを開始した。方法としてはSEREX2(Cancer Immunity3:5,2003)を用いることとした。まず、健常人より分離した単核球細胞をEBVで不死化しLCLを作成した。その細胞からRNAを抽出しcDNAを作成した。既知のそれぞれのmHaの全コード領域を増幅する特異的なプライマーを設計し、前述のcDNAをテンプレートとしてPCRによって増幅した。得られたPCR産物を用いてGatewayクローニングシステム(invitrogen)を用いて、目的とするmHaの由来蛋白を酵母細胞表面に発現させた。昨年の段階で、移植後の液性免疫反応が報告されているDBYと、既知のmHaの中で最もよく調べられているHA-1についてはこれらの作業がほぼ終了した。この1年では、他のmHaに関して酵母細胞表面への発現に成功した。今後、岡山大学において施行された固形腫瘍に対する同種移植後の保存血清、ならびに作成したmHaの由来蛋白を発現した酵母細胞を用いて、フローサイトメトリーでmHaに対する液性免疫反応を検討する段階である。また、慢性移植片対宿主病(chronic GVHDにおける液性免疫反応も同時に確認すべく、検体の収集を行っている。

我们正在研究对较小的组织相容性抗原（MHA）在移植物及其肿瘤中的涉及对次要组织相容性抗原（MHA）的参与（GVT效应）。 Recently, it has been reported that antibody responses to DBY, a mHa derived from the Y chromosome, is enhanced after donor lymphocyte infusion, and that there is a strong association between the presence or absence of this humoral immune response and recurrence after implantation, and first, screening for the presence or absence of antibody responses to known mHa (HA-1, HA-2, HA-3, HA-8, HB-1, DBY, uty，bcl2a1）。 SEREX2（癌症免疫3：5，2003）被用作该方法。首先，从健康个体中分离的单核细胞被EBV永生化以创建LCL。从细胞中提取RNA以产生cDNA。设计特定的引物来扩增每个已知MHA的整个编码区，并使用上述cDNA作为模板通过PCR扩增。使用获得的PCR产物，使用网关克隆系统（Invitrogen）在酵母细胞表面表达靶MHA衍生的蛋白。去年，DBY几乎完成了这些任务，DBY报道了植入后的体液免疫反应，而HA-1是已知的MHA最充分检查的HA-1。在过去的一年中，其他MHA在酵母细胞表面成功表达。未来将通过流式细胞仪使用储存的血清来研究对冈山大学进行的实体瘤以及表达产生的MHA衍生蛋白的酵母细胞的研究。此外，正在收集标本以同时确认慢性移植物抗宿主病（慢性GVHD）中的体液免疫反应。