難治性前立腺癌に対する細胞免疫治療に必要なヘルパーT細胞エピトープペプチドの同定

难治性前列腺癌细胞免疫治疗所需的辅助 T 细胞表位肽的鉴定

基本信息

批准号：
16790220
负责人：
小林博也
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Asahikawa Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

前立腺癌の免疫治療に有効な標的抗原として、six-transmembrane epithelial antigen of the prostate(STEAP)とWT1に注目して、その蛋白の腫瘍中の発現と、これらの分子に特異的なヘルパーT細胞の反応性について検討した。STEAP及びWT1の蛋白レベルの発現をウエスタンブロット法で検討した。前立腺癌細胞株(LNCaP,PC3,LAPC4,DU145)にはSTEAP及びWT1がいずれも発現しており、前立腺癌に対する免疫細胞治療の標的抗原になりうることが示された。更に興味深いことには、STEAPはメラノーマ細胞株やメラノーマ生検材料にも発現が認められた。このことは、STEAPが前立腺癌のみならずメラノーマ抗原としても機能することが示唆された。健常成人からリンパ球を単離し、これら分子に対する細胞性免疫反応を観察した。STEAP,WT1の全アミノ酸配列からアルゴリズム解析ソフトを用いて、個人間のHLA class II抗原に制約を受けずに多数のHLA class II抗原分子に結合可能なことが予測された15残基のペプチドをSTEAP,WT1から各々2個ずつ合成した。健常人末梢血から分離したCD4陽性T細胞と樹状細胞をペプチドの存在下で共培養し、その後複数回の刺激を行ってSTEAP,WT1ペプチド特異的ヘルパーT細胞ラインを5名の健常成人から樹立した。詳細なエピトープ解析からSTEAP102-116ペプチドはHLA-DR1,DR9,DR53拘束性に、STEAP192-206ペプチドはHLA-DR1,DR9,DR53拘束性に、WT1124-138ペプチドはHLA-DR53拘束性に、WT1247-261ペプチドはHLA-DR1,DR15拘束性にヘルパーT細胞を活性化させ、IFN-γあるいはGM-CSFなどのTH1サイトカインを分泌させた。またこれらのペプチドは複数のHLA-DR分子に結合してヘルパーT細胞を誘導したことから、promiscuousエピトープペプチドであることが示された。樹立されたヘルパーT細胞ラインは、いずれもSTEAP,WT1を発現する前立腺癌細胞株あるいはメラノーマ細胞株をHLA-DR分子を介して認識しサイトカインを分泌した。このことは、今回明らかにされたSTEAP並びにWT1エピトープペプチドは、生体内で自然な形態で発生しうるnaturally processed antigenic peptideであり、これらの分子を標的とする癌ペプチドワクチンの設計に寄与するものと考えられた。

我们专注于前列腺（STEAP）和WT1作为前列腺癌免疫疗法的有效靶抗原的六跨膜上皮抗原，并检查了肿瘤中蛋白质的表达以及特异于这些分子的辅助T细胞的反应性。通过蛋白质印迹研究了蛋白质水平的蛋白质水平。前列腺癌细胞系（LNCAP，PC3，LAPC4，DU145）表达了STEAP和WT1，表明它们可能是针对前列腺癌的免疫细胞疗法的靶抗原。更有趣的是，STEAP在黑色素瘤细胞系和黑色素瘤活检中也表达。这表明STEAP不仅起到了前列腺癌的作用，而且还充当黑色素瘤抗原。从健康的成年人中分离出淋巴细胞，并观察到细胞介导的对这些分子的免疫反应。使用算法分析软件，从STEAP和WT1的整个氨基酸序列中合成了15个残基的两个肽，预测它们能够与大量HLA II类II类抗原分子结合而不会受到人际HLA II类II类抗原的约束。从健康个体的外周血中分离出的CD4阳性T细胞和树突状细胞在肽的存在下共培养，然后多次进行刺激以建立五个健康成年人的STEAP和WT1肽特异性助手T细胞系。详细的表位分析表明，STEAP102-116肽是HLA-DR1，DR9，DR53限制性的，STEAP192-206肽是HLA-DR1，DR9，DR53限制性，WT1124-138肽是HLA-DR53限制性限制性限制性hla-dr53 dra dra1515151515-dra hhla hhla wt361 pettive-hla限制性，以及Th1细胞因子（例如IFN-γ或GM-CSF）的分泌。此外，这些肽与多个HLA-DR分子结合以诱导辅助T细胞，表明它们是混杂的表位肽。所有已建立的助手T细胞系都通过HLA-DR分子和分泌的细胞因子识别前列腺癌细胞系或黑色素瘤细胞系，表达STEAP和WT1。人们认为这是揭示的STEAP和WT1表位肽是自然加工的抗原肽，可以在其体内自然形式发生，并有助于设计针对这些分子的癌症肽疫苗。