魚類のリンパ球を識別する

识别鱼的淋巴细胞

基本信息

批准号：
16780133
负责人：
末武弘章
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16780133/
关键词：
トラフグ T細胞 CD抗原モノクローナル抗体トランスジェニック

项目摘要

本年度は抗CD抗体作製とリンパ球が可視化された魚の作出を試みた。<モノクローナル抗体の作製>本年度はトラフグCD4の遺伝子を哺乳類の培養細胞で発現させたものを抗原として抗トラフグCD4モノクローナル抗体を作製した。本抗体を用いて分離したリンパ球はヘルパーT細胞の特徴である細胞表面分子を発現していること、またこれら細胞はマイトジェン刺激により各種サイトカインを発現した。これは魚類においてもCD4陽性細胞がヘルパーT細胞であることを強く示唆するものである。また昨年度作製した抗トラフグCD8α抗血清で分離したリンパ球は細胞傷害性T細胞に特徴的な細胞表面分子を発現していることを示した。しかし、細胞傷害活性の測定には至らなかった。CD3εについてはCD4,CD8αと同様の方法を試みたものの、組み換えタンパク質の発現が誘導されず、抗体作製には至らなかった。<トランスジェニック魚の作出>トラフグCD8α転写調節領域を含むトランスジェニックゼブラフィッシュ(EGFP系統、DsRed系統)のスクリーニングを行ったが、トランスジェニック系列を得るには至らなかった。現在引き続きEGFP系統のスクリーニングを行っている。なおCD4遺伝子の転写調節領域はその周辺遺伝子であるLAG-3遺伝子を内包することが知られており、トラフグにおいてもLAG-3に相当すると考えられるCD4L-2遺伝子の同定はしたものの、転写調節領域DNA断片の作製には至らなかった。

今年，我们试图产生抗CD抗体并产生具有可视化的淋巴细胞的鱼类。 <单克隆抗体的产生>今年，使用在培养的哺乳动物细胞中作为抗原表达的水槽pufferfish CD4的基因制备了抗pufferfish pufferfish CD4单克隆抗体。使用此抗体表达细胞表面分子分离的淋巴细胞，这些抗体是辅助T细胞的特征，这些细胞通过有丝分裂原刺激表达了各种细胞因子。这强烈表明CD4阳性细胞也是鱼类中的辅助T细胞。它还表明，去年产生的抗抑制CD8α抗血清分离出去年的细胞表面分子的特征是细胞毒性T细胞的特征。但是，未确定细胞毒性活性。尽管尝试与CD3和CD8α相同的方法进行CD3ε，但未诱导重组蛋白的表达，也没有实现抗体的产生。 <筛选了包含金枪鱼pufferfishCD8α转录调节区域的转基因鱼>转基因斑马鱼（EGFP系，DSRED系）的产生，但没有获得转基因线。当前，正在筛选EGFP菌株。众所周知，CD4基因的转录调节区域包括周围基因的lag-3基因，尽管鉴定出与Tuna Pufferfish中的lag-3相对应的CD4L-2基因已被鉴定出来，但未产生转录性调节区域DNA片段。