低温誘導性細胞膜修復タンパク質に注目した植物耐凍性機構の解明とその応用

以冷诱导细胞膜修复蛋白为核心阐明植物耐冻机制及其应用

• 批准号: 04J09436
• 负责人: 河村 幸男
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Iwate University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J09436/
• 关键词: 耐凍性; 細胞膜; 膜修復; シロイヌナズナ; 植物; 低温順化

昨年度計画の目標は、1)EGTA、Ca^<2+>、Mg^<2+>存在下でのプロトプラストを用いた低温馴化前後での生存率の測定、2)synaptotagmin-likeタンパク質の特異抗体の作製、3)anti-synaptotagmin-like protein存在下でのプロトプラストを用いた低温馴化前後での生存率の測定、4)抗体を用いた内膜synaptotagmin isoformの検索とTOF-MSによる同定、の4項目であった。このうちの2項目めまではほぼ達成でき、3項目めの実験を検討しているときに、岩手大学農学部COE助教授として赴任することになり、日本学術振興会特別研究員を途中辞退することになった。2項目までの結果をまとめと、1)耐凍性の半分以上はCa^<2+>依存性であり、少なくともCa^<2+>は0.5mM以上必要であることが明らかとなった、2)synaptotagmin-likeタンパク質の重要なドメインであるC2Aドメインのペプチド抗体を作製したところ、synaptotagmin-likeタンパク質に特異的に反応する抗体が得られた。Mg^<2+>はこのCa^<2+>依存性の細胞膜修復に対して拮抗阻害することが報告されているので(Steinhardt et al. 1994)、当初はMg^<2+>存在下での生存率測定も行うことも検討されていた。しかしCa^<2+>依存性の耐凍性が以上の実験で十分に示されたので割愛することにした。上記に記したとおり、申請者は平成17年度1月15日より岩手大学農学部COE助教授として赴任することになったが、今回の研究で得られた実験結果を下に、引き続き、また実験規模を拡大し、低温馴化後の細胞の凍結に対する安定性上昇のメカニズムを細胞膜修復機構の観点から更なる研究を行っていく予定である。

去年计划的目标是1）在冷适应之前和之后使用原生质体在EGTA，Ca^<2+>和Mg^<2+>，2，2）测量生存率的测量。 4）使用抗体和通过TOF-MS识别内膜突触同工型。我几乎能够实现这一目标，直到第二点，当我考虑第三个实验时，我被指派被任命为COE的助理教授，Iwate University，Iwate University，Iwate University，以及IWATE的中途作为日本科学促进学会的特别研究员。 Summary of the results of up to two items: 1) it was revealed that more than half of the freeze tolerance was Ca^<2+> dependent, and that at least Ca^<2+> is required at least 0.5 mM, and 2) Peptide antibodies of the C2A domain, an important domain of the synaptotagmin-like protein, were prepared, and antibodies that specifically reacted to the synaptotagmin-like protein were 获得。由于已报告Mg^<2+>是为了拮抗抑制这种CA^<2+> - 依赖性细胞膜修复（Steinhardt等，1994），因此最初认为在Mg^<2+>存在下也测量了存活率。但是，上面的实验显示出足够的霜冻耐受性，因此我决定跳过它。如上所述，申请人将从2005年1月15日开始担任IWATE大学农业学院COE的助理教授。根据这项研究的实验结果，我们计划继续扩展实验规模并从细胞膜修复机制的角度进行进一步的研究，从而使细胞的稳定性降低稳固性，从而增加了细胞膜修复机制。