フラビウイルスの媒介節足動物種特異性に関する研究

黄病毒载体节肢动物物种特异性研究

基本信息

批准号：
04J09154
负责人：
好井健太朗
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J09154/
关键词：
フラビウイルスレプリコンパッケージングキメラ

项目摘要

フラビウイルスには多くの人畜共通感染症の原因ウイルスが含まれ、その多くは節足動物(ダニ、蚊)によって媒介される。ダニ/蚊媒介性のフラビウイルスは哺乳動物細胞では同様に感染し増殖するが、ダニ/蚊においては各々の媒介動物でしかウイルスは増殖せず、媒介動物特異的な感染・増殖様式の存在が示唆されるが詳細は明らかではない。ウイルスのゲノムより構造蛋白をコードする領域を欠損させたレプリコンは、細胞内において自己の複製は起こるが、構造蛋白が産生されないため、感染性のある粒子が放出されないため、ウイルスの複製機構の研究において有用な系として扱われている。そこでフラビウイルスの媒介動物特異的な増殖様式を解明するために、レプリコンを用いたダニ媒介性脳炎ウイルス(TBEV)および日本脳炎ウイルス(JEV:蚊媒介性)のキメラウイルス様粒子(キメラVLPs)を作成することを試みた。本研究において、ダニ媒介性フラビウイルスであるTBEVのレプリコンを北海道分離株Oshima株の感染性cDNAクローンを用いて構築し、また蚊媒介性のJEVの構造蛋白を発現するプラスミドをレプリコン導入細胞にトランスフェクトすることにより、JEV由来の粒子構造を持ちTBEVのレプリコンをゲノムとして持つキメラVLPsを分泌させた。キメラVLPsは一度のみの感染性を有しており、相補的に発現させた構造蛋白のmRNAとのrecombinationも起こしておらず、安全性にも優れていることが示された。また、キメラVLPsの節足動物由来培養細胞への感染性を検討することにより、フラビウイルスの媒介節足動物の特異性にはウイルスの侵入・増殖に関わる特異的な因子が関わっていることが示された。これらの成績はフラビウイルスの自然界における存続様式の解明に重要な知見をもたらし、今後のフラビウイルス感染症の疾病制御への展開が期待される。

黄病毒包括引起许多人畜共患疾病的病毒，其中大多数是通过节肢动物（蜱、蚊子）传播的。蜱/蚊传播的黄病毒以相同的方式在哺乳动物细胞中感染和繁殖，但在蜱和蚊子中，病毒仅在每种载体中繁殖，这表明存在载体特异性感染和繁殖模式，但细节尚未确定。不清楚。从病毒基因组中删除结构蛋白编码区的复制子可以在细胞内复制，但不会产生结构蛋白，也不会释放感染性颗粒，这就是为什么对病毒复制机制的研究很重要。中有用的系统。因此，为了阐明黄病毒的载体特异性传播模式，我们利用复制子I开发了蜱传脑炎病毒（TBEV）和日本脑炎病毒（JEV：蚊媒）的嵌合病毒样颗粒（嵌合VLP）。尝试创建它。在这项研究中，我们使用从北海道分离的大岛毒株的感染性 cDNA 克隆构建了 TBEV（一种蜱传黄病毒）的复制子，并将表达蚊传 JEV 结构蛋白的质粒转导到复制子转染的细胞中。转染细胞后，分泌出具有 JEV 衍生颗粒结构和 TBEV 复制子基因组的嵌合 VLP。嵌合VLP仅具有一次感染性，并且不会与互补表达的结构蛋白mRNA发生重组，这表明其具有极好的安全性。此外，通过检查嵌合VLP对节肢动物来源的培养细胞的感染性，我们发现黄病毒载体在节肢动物中的特异性与参与病毒入侵和增殖的特定因素有关。这些结果为阐明黄病毒在自然界中的生存模式提供了重要的知识，并有望促进未来黄病毒感染的疾病控制。