接着斑を構成する細胞骨格系タンパク、talinの機能解析

构成粘着斑的细胞骨架蛋白talin的功能分析

• 批准号: 04J02716
• 负责人: 辻岡 政経
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J02716/
• 关键词: タリン(talin); 細胞接着; HeLa細胞; 細胞性粘菌; RNAi; 細胞運動; 細胞質分裂

talinは細胞と基質の接着点(接着斑)の形成・制御に重要な役割を果たすタンパク質である。近年、ヒト、マウスをはじめ、様々な生物で二つ目のタリンが見つかっている。本研究では二種類タリンの機能の違いを解析している。二つのタリンの解析が比較的進んでいる細胞性粘菌を用いて、タリン二重破壊株と各一重破壊株の表現型を比較した。二つの一重破壊株の表現型は全く異なるが、それら全ての表現型は二重破壊株でより強くなった。また、タリンA破壊株の全ての欠陥はタリンBの過剰発現によりほぼ回復した。したがって細胞性粘菌において、二つのタリンの機能は部分的に重複しており、補い合っている事が示唆された。現在、動物細胞の二つのタリン(タリン1、タリン2)においても機能重複の有無を調べている。まず、HeLa細胞を用い、RNAiの手法により各タリンの発現抑制株の作成を試みた。どちらの発現抑制ベクターを導入した細胞も、コントロールベクターを導入した細胞と比べて、3〜4日後に生きている細胞が10%以下になった。生き残っていた細胞とコントロールの細胞からRNAをとり、RT-PCRにより発現レベルを確認したところ、両遺伝子ともそれぞれの発現抑制ベクターにより、転写レベルが20%以下に抑えられていた。発現抑制株を細胞培養用ディッシュに蒔き直して形を観察すると、どちらの発現抑制株も、接着する細胞がコントロールの細胞に比べて10%以下で、接着したものもほとんどが丸い形だった。細胞外マトリックスの成分として知られるコラーゲンやフィブロネクチン上に蒔き直すと、接着する細胞はやはり10%以下だったが僅かに増え、それらのほとんどはコントロールの細胞と同様に基質上で広がっていた。更なる実験が必要であるが、現在のところタリン1、タリン2発現抑制株は、どちらも同様に基質との接着が弱まっていると考えている。

塔林是一种蛋白质，在细胞和底物之间的粘附点（四个粘连）的形成和调节中起重要作用。近年来，在包括人类和小鼠在内的各种生物中发现了第二个塔林。这项研究分析了两种类型的塔林的功能差异。使用细胞粘液霉菌比较了塔林双重破坏性菌株和每种单一损坏菌株的表型，这些粘液霉菌在对两个TALIN的分析中相对先进。两种单一损坏菌株的表型完全不同，但它们在双层造成的菌株中都更强。此外，塔林·B的过表达几乎可以恢复塔林A干扰菌株中的所有缺陷。因此，建议两个塔林的功能在细胞粘液霉菌中重叠，并且它们相互补充。目前，我们还研究了两个动物细胞中是否存在功能重叠（Talin 1和Talin 2）。首先，我们尝试使用HeLa细胞使用RNAi方法来创建抑制每种Talin的表达的菌株。在与对照载体一起引入的细胞相比，在带有表达抑制载体的细胞中，在3-4天后活着的细胞中有10％或更少。从存活的细胞和对照细胞中获取RNA，并通过RT-PCR确认表达水平，并通过两个基因的各个表达抑制载体抑制转录水平至低于20％。当在细胞培养皿中转售表达抑制菌株并观察到形状时，两种表达抑制菌株的含量少于粘附的细胞与对照细胞相比的10％，并且大多数粘附的细胞都是圆形的。当回收到胶原蛋白和纤连蛋白（称为细胞外基质的成分）上时，粘附的细胞数量仍然低于10％，但略有增加，大多数像对照细胞一样散布在底物上。尽管需要进一步的实验，但我们认为塔林1和塔林2表达抑制菌株都同样削弱了对底物的粘附。

项目成果

Talin B is required for force transmission in morphogenesis of Dictyostelium

• DOI: 10.1038/sj.emboj.7600238
• 发表时间: 2004-06-02
• 期刊: EMBO JOURNAL
• 影响因子: 11.4
• 作者: Tsujioka, M;Yoshida, K;Inouye, K
• 通讯作者: Inouye, K