DNA複製に伴うヌクレオソーム構築反応の試験管内再構成

与 DNA 复制相关的核小体组装反应的体外重建

• 批准号: 04J01310
• 负责人: 久保 知大
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J01310/
• 关键词: mRNA; 新機能; 3'プロセッシング; 非翻訳領域; ポリアデニル化; RNA切断; 転写; 高等真核生物; クロマチン; 遺伝子発現; RNA干渉; RNAプロセッシング; クロマチンアセンブリー因子; クロマチン中間体; コアヒストン

本研究種目の研究成果をNucleic Acids Research誌(2006,vol:34,6264-6271)に発表した。高等真核生物では、1つの遺伝子から多様な種類のmRNAが産生される。このような遺伝子発現の多様性は、選択的スプライシングや選択的ポリアデニル化(alternative polyadenylation)により生み出されることが知られている。選択的ポリアデニル化により、翻訳されるタンパクの1次構造が変化する場合や成熟mRNAの3' UTRだけが変化する場合などがあるが、特に、3' UTRを変化させるような選択的ポリアデニル化に関してはその分子基盤は全く不明であった。論文ではpre-mRNAの切断反応に関わる因子として知られていたCleavage Factor Im複合体(CFIm)の細胞内機能を解析した。その結果、CFIがm3' UTR内での選択的ポリアデニル化に寄与していることを明らかにした。ヒトHeLa細胞において、CFIm複合体の25-kDaサブユニット(CFIm25)をRNA干渉法によりノックダウンし、いくつかの遺伝子のmRNAがどのような影響を受けるか解析した。その結果、CFIm25ノックダウンにより3' UTR内での選択的ポリアデニル化が劇的に変化することが明らかとなった。興味深いことに、CFImノックダウンによる3' UTR内でのポリA付加部位の選択では、上流側に存在するポリA付加部位が特異的に使用されることが示唆された。

该研究类别的结果发表在核酸研究（2006年，第34,6264-6271卷）中。在较高的真核生物中，单个基因产生多种mRNA。已知这种基因表达的多样性是通过替代剪接和替代聚腺苷酸化产生的。选择性的聚腺苷酸化可能会改变翻译蛋白的一级结构，或仅改变成熟mRNA的3'UTR，但是选择性聚腺苷酸化的分子基础会改变3'UTR，这是完全未知的，尤其是为了改变3'UTR的选择性聚苯基化。在本文中，我们分析了切割因子IM复合物（CFI​​M）的细胞内功能，该功能被称为涉及前MRNA的裂解反应的因子。结果表明，CFI有助于M3'UTR内的选择性聚腺苷酸化。在人类HeLa细胞中，CFIM复合物的25 kDa亚基（CFIM25）被RNA干扰法击倒，以分析几种基因的mRNA如何影响。结果表明，CFIM25敲低在3'UTR中显着改变选择性聚腺苷酸化。有趣的是，CFIM敲低选择了3'UTR中的Polya添加位点表明，上游Polya添加位点是专门使用的。

项目成果

Knock-down of 25kDa subunit of Cleavage Factor Im in HeLa cells alters alternative polyadenylation within3'UTR

HeLa 细胞中裂解因子 Im 25kDa 亚基的敲低改变了 3UTR 内的替代多聚腺苷酸化

• 发表时间: 2006
• 期刊: Nucleic Acids Research 34(21)
• 作者: M.Nakano;T.Kamo;A.Sugita;T.Handa;中村篤智 他;中村篤智 他;松永克志 他;松永克志 他;溝口照康 他;中村篤智 他;M.Kawaguchi et al.;M.Kawaguchi et al.;M.Kawaguchi et al.;M.Kawaguchi et al.;M.Kawaguchi et al.;M.Kawaguchi et al.;M.Kawaguchi et al.;M.Kawaguchi et al.;M.Kawaguchi et al.;M.Kawaguchi et al.;Migaku Kawaguchi;Migaku Kawaguchi;Migaku Kawaguchi;Migaku Kawaguchi;Migaku Kawaguchi;Migaku Kawaguchi;Migaku Kawaguchi;M.Kawaguchi et al.;M.Kawaguchi et al.;Migaku Kawaguchi;Migaku Kawaguchi;Mami Tojino;Tomohiro Kubo et al.
• 通讯作者: Tomohiro Kubo et al.