動原体に普遍的なタンパク質Mis12の均等染色体分配における必須機能の解明

阐明着丝粒普遍存在的蛋白质 Mis12 在染色体均匀分离中的基本功能

• 批准号: 04J01291
• 负责人: 清光 智美
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J01291/
• 关键词: 動原体; Mis12複合体; スピンドルチェックポイント; hMis12複合体; スピンドル; cell cortex; RNAi; Bub1

CENP-Aのセントロメア局在に必須な分裂酵母セントロメアタンパク質Mis18のヒトホモログhMis18の細胞内局在および、CENP-Aとの局在依存性を調べた。hMis18は分裂酵母同様、M期中期に動原体に局在せず、M期終期以降にセントロメア領域に局在することを見いだした。また、CENP-A RNAiではhMis18はセントロメアに局在したことから、ヒトhMis18がCENP-Aには依存せず局在することを示した。以上の内容はDevelopmental Cell誌に公表した。CENP-Aとは異なる経路で動原体構築、機能に必須な動原体タンパク質hMis12について、M期に物理的に相互作用する因子を質量分析により明らかにした。c20orf172,DC8,PMF1,AF15q14,HEC1,Nuf2,Spc25,Spc24,Bub1,BubR1,Bub3のcDNAをクローニングし、yeast two hybridによりこれらのタンパク質がどのように直接相互作用しうるか検討した。Bub1,BubR1がN末保存領域にあるTPR motifを介して、AF15q14と直接相互作用することを明らかにした。またTPR motifに変異を導入したBub1,BubR1ではBub1 RNAi, BubR1 RNAiの表現型を相補できないことを明らかにした。in vivoにおいてBub1,BubR1とAF15q14の相互作用がそれらの機能発現に必要であることが示唆された。Y2Hによる相互作用MAPとRNAiを用いた局在依存性の解析からhMis12はAF15q14を介してBub1/BubR1を動原体に局在させることが示唆された。以上の内容は現在投稿準備中である。

我们研究了人类同源性HMIS18的亚细胞定位，这是CENP-A的丝粒定位所必需的裂变酵母centromeric蛋白及其与CENP-A的定位依赖性。像裂变酵母一样，发现HMIS18在M中期位于中心粒区域，但在M末期之后的丝粒区域。此外，HMIS18位于CENP-A RNAi中的centromeres，表明人HMIS18已独立于CENP-A定位。以上信息已发表在发育细胞杂志上。 HMIS12的质谱法揭示了与M期物理相互作用的因素，HMIS12是一种与CENP-A不同的丝粒蛋白，这是一种丝状蛋白。克隆C20ORF172，DC8，PMF1，AF15Q14，HEC1，NUF2，SPC24，SPC24，BUB1，BUBR1，BUB3的cDNA，以及这些蛋白质如何直接与酵母菌两种杂种直接相互作用。我们已经表明，BUB1和BUBR1通过位于N末端保守区域的TPR基序直接与AF15Q14相互作用。我们还透露，已在TPR基序中引入突变引入的BUB1和BUBR1无法补充BUB1 RNAi和BubR1 RNAi的表型。有人提出，BUB1，BUBR1和AF15Q14在体内的相互作用对于它们的功能表达是必需的。使用Y2H相互作用图和RNAi的定位依赖性分析表明，HMIS12通过AF15Q14将BUB1/BUBR1定位在Centromeric中。以上目前正在准备提交。