自己脂肪組織由来幹細胞と自己多血小板血漿を応用した骨の再生

使用自体脂肪组织干细胞和自体富含血小板的血浆进行骨再生

基本信息

批准号：
15791164
负责人：
綿谷早苗
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

(目的)未分化間葉系幹細胞を大量培養し骨芽細胞へ分化させる再生医療では、現在骨髄由来の幹細胞が主流だが、骨髄穿刺による患者の苦痛や危険性を考慮し、われわれはより安全に幹細胞を採取できる皮下脂肪組織に着目した。脂肪由来未分化間葉系幹細胞(以下AdSCs)は、旺盛な増殖能と軟骨や骨への分化能を示すが、凍結保存後の増殖、分化能は著しく低下する。そこで凍結幹細胞の分化ならびに増殖を促進する因子で、なおかつ動物由来成分を排除した、安全で効率の良い培養条件を模索した結果、多数の自己成長因子を含む自己多血小板血漿(Platelet-rich plasma:以下PRP)を選択し、細胞培養時におけるその効果を検討した。(方法)同意を得た患者の脂肪から抽出し培養後-80℃で保存したヒトAdSCsとヒト線維芽細胞を使用した。患者の全血を遠心分離により血球成分と分離してフィブリン塊を除去したPRPを培養液に10%の割合で添加したものをPRP培養液とし、現行法のウシ血清(FCS)を10%添加したFCS培養液、自己血清(10%)培養液の3条件について、凍結保存後のヒトAdSCsとヒト線維芽細胞の増殖・分化能を各々比較した。(結果)MTT assayにおいて、線維芽細胞ではPRP>血清>FCSの順に高い増殖能を示した(Mann-Whitney U-test p>0.05で有意差あり)。骨芽細胞とAdSCsではPRP添加群、ヒト血清添加群がウシ血清より高い増殖能を示した。さらにPRP添加群では早期から分化が促進され、骨分化培地を用いずに基礎培地+10%PRPのみでも骨分化が誘導された。(考察)PRPは、細胞の種類や状態により、増殖・分化という異なるはたらきを促進するものと示唆された。

（目的）在大量培养未分化间充质干细胞并分化为成骨细胞的再生医学中，来自骨髓的干细胞目前是主流，我们关注的是可以采集干细胞的皮下脂肪组织。脂肪来源的未分化间充质干细胞（以下简称AdSC）表现出旺盛的增殖和分化成软骨和骨的潜力，但其增殖和分化潜力在冷冻保存后显着降低。因此，我们寻找安全有效的培养条件，使用促进冷冻干细胞分化和增殖的因子，并排除动物源性成分，结果发现了自体富血小板血浆（Platelet-richplasma），其中含有。我们选择了多种自体生长因子，并考察了其在细胞培养过程中的作用。 (方法)从同意的患者的脂肪中提取人AdSC和人成纤维细胞，培养并在-80°C保存。通过离心将患者的全血与血细胞成分分离，并以10%的比例在培养基中添加纤维蛋白凝块，并在培养基中添加10%的现行方法的牛血清（FCS）。我们比较了人AdSCs和人成纤维细胞在FCS培养基和自体血清（10%）培养基三种条件下冷冻保存后的增殖和分化能力。 (结果) MTT法中，成纤维细胞的增殖能力依次为PRP>血清>FCS(Mann-Whitney U-test有显着性差异p>0.05)。对于成骨细胞和AdSCs，添加PRP组和添加人血清组比添加牛血清组表现出更高的增殖能力。此外，在PRP添加组中，从早期开始促进分化，即使不使用成骨分化培养基，仅使用基础培养基+10％PRP也可诱导成骨分化。（讨论）PRP 被认为可以根据细胞类型和状态促进不同的增殖和分化功能。