哺乳類精子受精能獲得過程を調節するリン酸化タンパク質の網羅的解析

调节哺乳动物精子获能过程的磷酸化蛋白的综合分析

基本信息

批准号：
15790860
负责人：
藤ノ木政勝
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Dokkyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

一昨年度、昨年度と行なってきた新規リン酸化タンパク質の検出において見いだされた受精能獲得過程の初期に脱リン酸化される75kDaタンパク質についてさらに解析を進めた。その結果、75kDaタンパク質の脱リン酸化はアルブミン依存的であることが分かった。アルブミンは受精能獲得において必須の成分である事から、75kDaタンパク質の脱リン酸化は受精能獲得と密接な関係にあると推測された。また、この脱リン酸化は受精能獲得開始から20分経った所ではまだ起こっておらず30分経った所では起こっていた。この頃の精子の状態としては複数の精子が頭部をくっつけて団子状態になる時期でありこの現象はアルブミン依存的であることから、この75kDaタンパク質は膜に存在し脱リン酸化されることで精子同士の結合に何らかの関係があると予想された。しかし、Triton可溶化分画にはこの75kDaタンパク質は含まれないことから、75kDaタンパク質は膜タンパク質ではないと結論づけられ、他様々な検討の結果として外側粗大繊維もしくはミトコンドリア鞘に含まれるタンパク質である可能性が考えられた。従って、75kDaタンパク質は頭部に局在する可能性が低い事から精子同士の頭部での結合には関係ないと結論づけた。さらに、この75kDaタンパク質の脱リン酸化に関わる酵素の検討を行なった。受精能獲得に関与する脱リン酸化酵素としてはtype1/2Aフォスタファーゼが知られているのでその阻害剤を用いて検討した所、type1/2Aフォスタファーゼの阻害により有意に受精能獲得が促進されたが75kDaタンパク質の脱リン酸は抑えられなかったことから、75kDaタンパク質の脱リン酸化はtype1/2Aフォスタファーゼによる脱リン酸化ではないと結論づけられた。現在type2Bフォスタファーゼ(カルシニューリン)との関連について調べている。

我们进一步分析了75KDA蛋白，该蛋白在去年在发现新型磷酸化蛋白的检测中发现的施肥能力采集过程的早期脱磷酸化。结果表明，75KDA蛋白的去磷酸化是白蛋白依赖性的。由于白蛋白是实现生育能力的重要组成部分，因此据推测，75KDA蛋白的去磷酸化与实现生育力密切相关。此外，这种去磷酸化尚未在受精能力开始后20分钟发生，并且在30分钟后发生。目前，精子状态是当多个精子粘在一起并变成饺子时，这种现象是白蛋白依赖性的，因此可以预测，这种75kDa蛋白存在于膜上并被脱磷酸化，从而导致与精子结合的某种关系。但是，由于Triton溶解的馏分不包含这种75KDA蛋白，因此得出结论，75KDA蛋白不是膜蛋白，并且由于其他各种研究，因此认为它可能是外部粗纤维中包含的蛋白质。因此，我们得出的结论是，75KDA蛋白与精子对头结合无关，因为它不太可能定位在头部。此外，我们研究了该75KDA蛋白的去磷酸化涉及的酶。 1/2A型固定酶被称为涉及受精能力获得的去磷酸化酶，因此我们使用抑制剂对其进行了研究。然而，对1/2a福氏度的抑制作用显着促进了受精能力的获取，但未抑制75KDA蛋白的去磷酸盐，我们得出的结论是，75KDA蛋白的去磷酸化不是通过1/2a fostaphase型的去磷酸化。我们目前正在研究与Type2b福音酶（钙调神经酶）的关系。