3次元培養法およびラットモデルを用いた、腫瘍血管新生への血小板による効果の解析

3D培养法及大鼠模型分析血小板对肿瘤血管生成的影响

基本信息

批准号：
15790702
负责人：
林田哲
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790702/
关键词：
血管新生血小板 VEGF HUVEC

项目摘要

血小板の存在により腫瘍血管新生が増強されるか、またその際に血小板と腫瘍細胞の直接接着が重要かどうかを検討した。腫瘍細胞は膵癌株(BxPC-3)と乳癌株(MCF-7)を用いた。血小板は採血後分離し、非活性化血小板とトロンビンによる活性化血小板を用意した。これら血小板と腫瘍細胞を8時間培養した後、以下の実験に使用した。1)培養上清を培地として、コラーゲンゲルとHUVECを用いた3次元培養法を行い、生じた管腔形成の長さを測定して、Control群との比を得ることにより血管新生の指標とした。2)ELISA法を用いて培養上清中のVEGF量を測定し、腫瘍のみ培養した群との比を求めた。腫瘍細胞のみからの培養上清を使用した群はControl群と比べ1〜1.2倍の管腔形成を認めたが、腫瘍細胞と活性化および非活性化血小板を共培養し、その培養上清を使用した群では1.5〜1.8倍と著明な増加率を認めた。一方Double chamber法を用いて腫瘍細胞と活性化血小板を分離培養し、その培養上清を使用した群では、1.6〜1.8倍であったが、同様に腫瘍細胞と非活性化血小板を分離培養し、その培養上清を使用した群では、1.2〜1.3倍に留まった。VEGF量では、腫瘍細胞と活性化血小板の共培養群において、腫瘍のみ培養群の約2.3〜2.5倍と最も上昇を認め、腫瘍細胞と非活性化血小板の共培養群では1.6〜1.8倍であった。一方腫瘍細胞との分離培養群では、血小板の活性化・非活性化による差はなく、腫瘍のみ培養群の1.7〜1.9倍であった。血小板と腫瘍の両存在下では、両者の相互作用で血管新生を増強していると考えられるが、その機序として腫瘍と血小板が直接接着することにより、両者が活性化し、腫瘍血管新生の増強を行う機構が存在することが示唆された。またその際には、VEGFと同時にそれ以外の血管新生因子も関わっている可能性があると考えられた。

我们研究了血小板的存在是否增强肿瘤血管生成以及在这种情况下血小板和肿瘤细胞之间的直接粘附是否很重要。肿瘤细胞是胰腺癌菌株（BXPC-3）和乳腺癌菌株（MCF-7）。血小板在收集血液后分离，并准备灭活的血小板和凝血酶激活的血小板。将这些血小板和肿瘤细胞培养8小时，然后在以下实验中使用。 1）使用培养上清液作为培养基，使用胶原蛋白凝胶和HUVEC进行3D培养方法，并测量产生的管腔形成的长度，并获得了对照组的比率，以形成血管生成的指标。 2）使用ELISA方法测量培养上清液中的VEGF量，并确定仅培养肿瘤的组的比率。使用单独的肿瘤细胞培养上清液的组显示出比对照组的管腔形成的1至1.2倍，但是使用共同培养和非活性血小板的组，使用培养上清液的组显着增加了1.5至1.8次。另一方面，使用双腔室法分离并培养肿瘤细胞和活化的血小板，使用培养上清液的组为1.6至1.8次，但是肿瘤细胞和不活跃的血小板类似地培养，并且在组中，使用培养物的上清液仅为1.2至1.3次。 VEGF含量比共培养肿瘤细胞和活化血小板的纯肿瘤培养基的2.3-2.5倍，是肿瘤细胞共培养组和灭活血小板中仅肿瘤培养的组的1.6-1.8倍。另一方面，在具有肿瘤细胞的孤立培养基中，由于血小板激活或灭活而没有差异，仅肿瘤比肿瘤培养基团高1.7至1.9倍。在存在血小板和肿瘤的情况下，两者之间的相互作用被认为可以增强血管生成，并且有人提出，这种机制有一种机制，肿瘤和血小板可以直接附着，从而激活并增强肿瘤血管生成。在这种情况下，还认为其他血管生成因子可能与VEGF同时涉及。