Rab7低分子量G蛋白質による後期エンドソーム/リソソーム系輸送制御機構の解明

Rab7低分子量G蛋白阐明晚期内体/溶酶体系统转运控制机制

• 批准号: 15790153
• 负责人: 水野 広一
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790153/
• 关键词: Rab7; Rab8; 後期エンドソーム; リソソーム; トランスゴルジネットワーク; RING finger motif; ユビキチン; EGF受容体

研究代表者は、これまでにCytoTrap法を用いてRab7低分子量G蛋白質の新規標的蛋白質Rabring7を同定している。本研究では、Rab7による後期エンドソーム/リソソーム系の輸送制御を解明することを目的に、Rabring7の解析を進めた。そのなかで、Rabring7にはアミノ酸レベルで約40%の相同を示す相同遺伝子が存在することを見い出した。この遺伝子産物は、Rab7とは結合せずにRab8と特異的に結合することからRabring8と命名した。Rabring8もRabring7と同様に、N末端側にRab結合領域、C末端側にRING finger motifしており、このRING finger motifがRabring8によるRab8のポリユビキチン化反応に寄与していることを明らかにした。Rabring8によるRab8のポリユビキチン化はK48Rユビキチン変異体を発現させた細胞でも観察されたこと、また、Rabring8の強制発現により細胞内Rab8の発現量は変化しなかったことから、Rabring8はユビキチンープロテアソーム系を介してRab8の発現量を調節しているのではないことが示唆された。Rab8はトランスゴルジネットワーク(TGN)から形質膜への輸送を制御すると考えられている。実際、Rabring8の強制発現によりTGNから形質膜へのEGF受容体の輸送が、GTP結合型Rab8を強制発現させた場合と同様に抑制を受けた。ユビキチンは後期エンドソーム/リソソーム系輸送制御においても鍵となる分子であることから、来年度はRabring8で得られた知見をもとに、Rabring7とユビキチン化反応との関連に注目した解析を行いたい。このように本年度の研究は予想以上に進展し、当初の目的はほぼ達成できた。

迄今为止，研究代表使用了细胞体方法来确定Rab7低分子量G蛋白的新靶蛋白Rabring7。在这项研究中，促进了Rabring7分析，以通过RAB7阐明晚期/溶酶体系统的转运控制。其中，我们发现Rabring7在氨基酸水平约为40％的氨基酸水平上具有一组clomenting基因。该基因产物被命名为Rabring8，因为它专门与RAB8结合而无需结合RAB7。 Rabring8与Rabring7一样，在C末端的n端侧和环指基序上具有RAB结合区域，这表明环指基序有助于Rabring8有助于Rab8 Poliubikitin Reaction8。 Rabring8是基于泛素的 - 基于蛋白酶，因为在指示K48R泛素转化的细胞中观察到Rabring8的多比基素化，并且细胞中的Rab8量没有变化，因为Rabring8的强制性表达。 Rab8的数量未经调整。人们认为Rab8可以控制经甲基网络（TGN）向变换剂的运输。实际上，强行表达的Rabring8，EGF受体从TGN转移到形式的膜的转运被抑制，就像强行表达的GTP键入的Rab8一样。由于泛素在晚期/溶酶体转运控制中也是一个关键分子，因此我们要根据明年Rabring8获得的知识进行分析，该分析侧重于Rabring7和泛素反应之间的关系。这样，今年的研究取得了比预期的要多，并且最初的目的几乎实现了。

项目成果

Mizuno, K.: "Rabring7,a novel Rab7 target protein with a RING finger motif"Mol.Biol.Cell. 14. 3741-3752 (2003)

Mizuno, K.：“Rabring7，一种带有环指基序的新型 Rab7 靶蛋白”Mol.Biol.Cell。