脂質成長因子受容体EDG-1の血管内皮における発現調節機構の解析

血管内皮脂质生长因子受体EDG-1表达调控机制分析

• 批准号: 15790119
• 负责人: 五十嵐 淳介
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kagawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790119/
• 关键词: 血管内皮細胞; スフィンゴ脂質; 血管新生; 内皮型NO合成酵素; G蛋白結合型受容体; 成長因子; G蛋白質結合型受容体

スフィンゴシン1リン酸(Sphingosine 1-Phosphate、S1P)は血小板に由来する脂質成長因子であり、血管内皮細胞のG蛋白結合型受容体であるS1P_1(EDG-1)を介して血管新生を促す。申請者は活性酸素分子種(Reactive Oxygen Species、ROS)が内皮細胞におけるS1P_1の発現レベルにどのような影響を与えるか検討した。ウシ大動脈由来の内皮細胞(BAEC)においてROSの一種である過酸化水素を細胞外から投与すると、用量依存的にかつ極めて急性なS1P_1蛋白質発現レベルの増加が観察される(ウエスタンブロット法、刺激後三十分で約十倍、EC_<50>=^〜50μM)。かかる過酸化水素によるS1P_1蛋白質発現レベルの増加はSrcファミリーチロシンキナーゼの阻害剤であるPP2により完全に抑制されたが、過酸化水素はS1P_1のmRNA発現レベルには有意な変化を与えなかった。過酸化水素によって前処置され、S1P_1を多量に発現したBAECでは、S1Pに対する反応性が有意に亢進していた(MAPキナーゼ及び内皮型NO合成酵素のリン酸化レベルはホスホウエスタン法で、また、細胞増殖能は試薬WST-8を用いて検討した)。一方過酸化水素は、内皮細胞に発現するもう一つのS1P受容体サブタイプであるS1P_3受容体の発現レベルには影響しなかった。動脈硬化や炎症などが進行している血管床ではROSの産生が亢進していることが知られているが、これらの結果はそのような条件下で過酸化水素が内皮細胞のS1P_1受容体蛋白質発現増加を介して血管新生を促進させる可能性を示唆するものである。今後、細胞生物学的な手法を用い、過酸化水素によるS1P_1受容体発現増加の生理学的意義をさらに詳しく検討する予定である。

1-磷酸盐（S1P）是源自血小板的脂质生长因子，并通过血管内皮细胞中的G蛋白结合受体S1P_1（EDG-1）促进血管生成。申请人研究了活性氧（ROS）如何影响内皮细胞中S1P_1的表达水平。当过氧化氢（一种类型的ROS）在牛主动脉（BAEC）中细胞外施用，从牛主动脉（BAEC）中给药时，S1P_1蛋白表达水平的极度急剧升高以剂量依赖性的方式（蛋白质印迹，大约十次，在刺激后大约十次）。 PP2（SRC家族酪氨酸激酶的抑制剂）完全抑制了过氧化氢S1P_1表达水平的升高，而过氧化氢并未显着改变S1P_1的mRNA表达水平。用过氧化氢预处理并表达高量的S1P_1（使用磷脂方法来检查MAP激酶和内皮NO合酶的磷酸化水平，并使用试验WST-8检查了细胞增殖电位）。另一方面，过氧化氢不会影响S1P_3受体的表达水平，S1P_3受体是内皮细胞中表达的另一种S1P受体亚型。众所周知，在动脉粥样硬化和炎症正在进行的血管床中，ROS产生增加，但是这些结果表明，在这种情况下，过氧化氢可以通过增加内皮细胞中S1P_1受体蛋白的表达来促进血管生成。将来，我们将进一步研究使用细胞生物学技术通过过氧化氢来增加S1P_1受体表达的生理意义。

项目成果

Induction of LOX-1 and iNOS expression by ischemia-reperfusion and opposing effect of L-arginine

缺血再灌注诱导 LOX-1 和 iNOS 表达以及 L-精氨酸的对抗作用

• 发表时间: 2003
• 期刊: FASEB J 17
• 作者: Kosaka H;Yoneyama H;Zhang L;Fujii S;Yamamoto A;Igarashi J
• 通讯作者: Igarashi J

Dantas APV, Igarashi J, Michel, T.: "Sphingosine 1-phosphate and control of vascular tone"Am.J.Physiol. 284. H2045-H2052 (2003)

Dantas APV、Igarashi J、Michel, T.：“1-磷酸鞘氨醇和血管张力的控制”Am.J.Physiol。