脂肪組織の脂質代謝におけるアセトアセチルCoA合成酵素の生理的意義の解明

阐明乙酰乙酰辅酶A合酶在脂肪组织脂质代谢中的生理意义

• 批准号: 15790054
• 负责人: 山崎 正博
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hoshi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790054/
• 关键词: ケトン体; 脂肪組織; 転写因子; 性ホルモン

本年度はアセトアセチルCoA合成酵素の脂肪組織における生理的意義の解明を目的に、以下のような実験を行った。本酵素の脂肪組織における影響を見る目的で、本酵素遺伝子の一過性過剰発現系の構築を目指した。昨年度のsiRNA法と同様にリポフェクション法による外来遺伝子の導入によって前駆脂肪細胞(3T3-L1細胞)における本酵素遺伝子の過剰発現を行ったが、脂肪細胞の短期間の培養では目立った表現系は観察されなかった。また、長期間培養では内在性AACSの発現量に減少傾向が見られた。現在、長期間に渡りsiRNA及び本酵素遺伝子が安定に発現する系の構築を試みている。また、本酵素遺伝子の上流配列に存在する転写活性化部位の同定をルシフェラーゼアッセイ法により検討した。その結果、脂肪細胞分化時にはC/EBP類の結合する配列が特に重要であることを示唆するデータが得られた。今後、ゲルシフトアッセイ法を用いて詳しい検討を行う予定である。また、本酵素遺伝子は他の組織に比べ雄の皮下脂肪組織において顕著に高発現していることが明らかになっている。本年度は脂肪細胞の大きさと本酵素遺伝子の発現量の相関関係という観点から検討を行った。成体ラットより脂肪組織を摘出し、脂肪細胞の直径によって四段階に分け、各々の本酵素遺伝子発現量を雌雄で比較した。その結果、本酵素遺伝子は主に直径100μmの脂肪細胞で発現していることが明らかとなった。また、腸間膜部ではどの大きさの脂肪細胞でも本酵素遺伝子発現量に雌雄で変化は無かったが、皮下部では200μm以上の大きさを持つ脂肪細胞で雄でのみ顕著な発現が見られた。このことから、本酵素遺伝子は雄の皮下部に存在する巨大脂肪細胞で特異的な発現をすることが明らかとなった。今後は、脂肪細胞の大きさと本酵素による脂質合成への影響、並びに性ホルモン類との間にある関係を解明することを目指して実験を進める予定である。

今年，我们进行了以下实验，以阐明乙酰乙酰辅酶A合酶在脂肪组织中的生理意义。为了研究这种酶对脂肪组织的影响，我们旨在构建该酶基因的瞬时过表达系统。与去年的siRNA方法相似，该酶基因在前膜细胞（3T3-L1细胞）中过表达，通过使用LiPofection引入外源基因，但在脂肪细胞的短期培养中未观察到明显的表达系统。此外，长期培养物中内源性AAC的表达水平降低。目前，我们正在尝试构建一个系统，在该系统中，该酶的基因在很长一段时间内稳定地表达。此外，通过荧光素酶测定法研究了酶基因上游序列中存在的转录活化位点的鉴定。结果，表明在脂肪细胞分化过程中C/EBP的结合序列尤为重要。将来，将使用凝胶轮换测定法进行详细检查。还已经表明，该酶基因在雄性皮下脂肪组织中的表达明显比其他组织更明显。今年，我们研究了脂肪细胞的大小与该酶基因的表达水平之间的关系。从成年大鼠中取出脂肪组织，根据脂肪细胞的直径分为四个阶段，并比较了男性和女性之间酶基因的表达水平。结果，揭示了该酶基因主要在直径为100μm的脂肪细胞中表达。此外，在肠系膜区域中，该酶基因的表达水平在任何大小的脂肪细胞中没有改变，但在皮下区域中，男性在脂肪细胞中的表达水平显着表达，大小为200μm或更多。这表明该酶基因在雄性皮下区域中存在的巨型脂肪细胞中特别表达。将来，我们计划进行实验，目的是阐明脂肪细胞大小，该酶对脂质合成的影响和性激素之间的关系。