脂肪組織の脂質代謝におけるアセトアセチルCoA合成酵素の生理的意義の解明

阐明乙酰乙酰辅酶A合酶在脂肪组织脂质代谢中的生理意义

• 批准号: 15790054
• 负责人: 山崎 正博
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hoshi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790054/
• 关键词: ケトン体; 脂肪組織; 転写因子; 性ホルモン

本年度はアセトアセチルCoA合成酵素の脂肪組織における生理的意義の解明を目的に、以下のような実験を行った。本酵素の脂肪組織における影響を見る目的で、本酵素遺伝子の一過性過剰発現系の構築を目指した。昨年度のsiRNA法と同様にリポフェクション法による外来遺伝子の導入によって前駆脂肪細胞(3T3-L1細胞)における本酵素遺伝子の過剰発現を行ったが、脂肪細胞の短期間の培養では目立った表現系は観察されなかった。また、長期間培養では内在性AACSの発現量に減少傾向が見られた。現在、長期間に渡りsiRNA及び本酵素遺伝子が安定に発現する系の構築を試みている。また、本酵素遺伝子の上流配列に存在する転写活性化部位の同定をルシフェラーゼアッセイ法により検討した。その結果、脂肪細胞分化時にはC/EBP類の結合する配列が特に重要であることを示唆するデータが得られた。今後、ゲルシフトアッセイ法を用いて詳しい検討を行う予定である。また、本酵素遺伝子は他の組織に比べ雄の皮下脂肪組織において顕著に高発現していることが明らかになっている。本年度は脂肪細胞の大きさと本酵素遺伝子の発現量の相関関係という観点から検討を行った。成体ラットより脂肪組織を摘出し、脂肪細胞の直径によって四段階に分け、各々の本酵素遺伝子発現量を雌雄で比較した。その結果、本酵素遺伝子は主に直径100μmの脂肪細胞で発現していることが明らかとなった。また、腸間膜部ではどの大きさの脂肪細胞でも本酵素遺伝子発現量に雌雄で変化は無かったが、皮下部では200μm以上の大きさを持つ脂肪細胞で雄でのみ顕著な発現が見られた。このことから、本酵素遺伝子は雄の皮下部に存在する巨大脂肪細胞で特異的な発現をすることが明らかとなった。今後は、脂肪細胞の大きさと本酵素による脂質合成への影響、並びに性ホルモン類との間にある関係を解明することを目指して実験を進める予定である。

今年，我们进行了以下实验，旨在阐明乙酰乙酰辅酶A合酶在脂肪组织中的生理意义。为了检查该酶对脂肪组织的影响，我们旨在构建该酶基因的瞬时过表达系统。与去年使用的siRNA方法类似，我们通过使用脂质转染法引入外源基因，在前脂肪细胞（3T3-L1细胞）中过度表达该酶基因，但在脂肪细胞的短期培养过程中没有观察到明显的表达。完毕。此外，在长期培养过程中，内源性AACS的表达水平有下降的趋势。目前，我们正在尝试构建siRNA和该酶基因长期稳定表达的系统。此外，使用荧光素酶测定方法研究了该酶基因上游序列中存在的转录激活位点的鉴定。结果，获得的数据表明 C/EBP 的结合序列在脂肪细胞分化过程中特别重要。未来，我们计划使用凝胶位移测定方法进行详细的研究。此外，已经表明，与其他组织相比，该酶基因在男性皮下脂肪组织中显着表达。今年，我们从脂肪细胞大小与该酶基因表达水平的相关性角度进行了研究。切取成年大鼠的脂肪组织，根据脂肪细胞直径分为四个阶段，比较雄性和雌性之间各酶基因的表达水平。结果表明，该酶基因主要在直径为100μm的脂肪细胞中表达。此外，在肠系膜区域，在任何大小的脂肪细胞中，该酶基因的表达水平在男性和女性之间没有差异，但在皮下区域，仅在男性中在200大小的脂肪细胞中观察到显着表达。 μm以上。这些结果表明，该酶基因在男性皮下区域的巨大脂肪细胞中特异性表达。未来，我们计划进行实验，旨在阐明脂肪细胞的大小、这种酶对脂质合成的影响以及性激素之间的关系。