CD28ファミリー分子によるT細胞活性化調節の分子機構

CD28家族分子调控T细胞活化的分子机制

基本信息

批准号：
15790053
负责人：
原田陽介
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790053/
关键词：
T細胞補助シグナルシグナル伝達 CD28 NFκB

项目摘要

CD28 signalの特徴の一つとして、IL-2の産生増強があげられる。IL-2の転写は様々な転写因子がそのpromoter領域に結合することで調節されているが、なかでもNFκBはCD28のco-stimulationに対する依存性が高いことが知られている。近年、長らく謎であったTCR signalによるNFκB活性化のpathwayの解析が進み、PKC_θ,CARMA1,Bcl10といった分子が重要であることが明らかになってきた。しかし、CD28がこれらの分子にどのような影響をあたえるのか、またTCR signalとは違うCD28特有のシグナルが存在するのかといった疑問に対しての解答はまだほとんど出ていない。そこでBcl10がCD28 signalによるNFκBの活性化にどのような役割をはたしているのかを解析することにした。Jurkat細胞にBcl10を過剰発現させ、CD28刺激によるIL-2 promoterおよびNFAT, CD28RE, NFκB siteの活性化を測定した。Bcl10を過剰発現させるとCD28刺激によるCD28REおよびNFκB siteの活性化が著しく増強された。一方、NFAT siteの活性化にはほとんど影響がなかった。また、Bcl10による増強効果はPKCθの阻害剤の添加、またはPKCθのドミナントネガティブ体により強く阻害された。CD28 signalがBcl10分子に与える影響を調べるために、CD28 signalがBcl10のリン酸化及び細胞膜への移行を誘導するかを検討したところ、Bcl10分子はCD28刺激に伴い、リン酸化と細胞膜への移行が観察された。さらに、CARMA1を過剰発現させるとBcl10同様にCD28シグナルによるNF-κBの活性化を増強し、CARMA1のドミナントネガティブ体はBcl10によるNF-κBの活性化増強を阻害した。以上の結果は、PKCθ-CARMA1-Bcl10 pathwayがCD28依存性のNFκB活性化に非常に重要な役割を担っていることを示唆している。

CD28信号的特征之一是其IL-2的产生增强。 IL-2转录受各种转录因子与其启动子区域的结合调节，而NFκB高度依赖于CD28共刺激。近年来，TCR信号对NFκB激活的途径的分析已经发展了很长时间，并且很明显，诸如PKC_θ，Carma1和Bcl10之类的分子很重要。但是，关于CD28如何影响这些分子的问题，或者CD28与TCR信号不同的信号是否有没有答案。因此，我们决定分析BCL10通过CD28信号激活NFκB的作用。测量IL-2启动子和NFAT，CD28RE和NFκB位点的BCL10和CD28刺激的Jurkat细胞过表达。 Bcl10的过表达通过CD28刺激显着增强了CD28RE和NFκB位点的激活。另一方面，对NFAT位点的激活几乎没有影响。此外，通过添加PKCθ的抑制剂或PKCθ的主要负面形式，BCL10的增强效应强烈抑制。为了研究CD28信号对BCL10分子的影响，我们研究了CD28信号是否诱导磷酸化并迁移到细胞膜，并观察到Bcl10分子对CD28刺激的磷酸化并迁移到细胞膜。此外，CARMA1的过表达通过与BCl10相似的CD28信号增强了NF-κB的激活，而CARMA1的主要负面形式抑制了Bcl10对NF-κB激活的增强。以上结果表明，PKCθ-CARMA1-BCL10途径在CD28依赖性NFκB激活中起着非常重要的作用。