大脳皮質の構築に必須なアダプター蛋白質Dab1及びその結合蛋白質の機能解析

大脑皮层构建所必需的接头蛋白 Dab1 及其结合蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
15780192
负责人：
守村敏史
金额：
$ 2.43万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞外マトリクスタンパク質Reelinは、標的ニューロンに発現するアダプタータンパク質Disabeld1(Dab1)のSrcファミリーチロシンキナーゼによるチロシンリン酸化を誘導する事により、ニューロンの位置を決定しているものと考えられているが、その詳細な分子機構は不明である。私は、Reelin受容体がendocytosisに特殊化し細胞内輸送の制御を受けるリポ蛋白質受容体ファミリーに属する事から、Dab1の機能として受容体の細胞内輸送に関係しているとの仮説を立てて検証した。その結果、1.Dab1欠損ニューロンでのReelin受容体の細胞表面での発現は低下している、2.Dab1はReelin受容体の細胞表面への輸送を両者の相互作用を通じて促進する、3.Dab1のReelin受容体に対する親和性は細胞表面で著しく低下(もしくは消失)する、4.Reelin刺激後Dab1はReelin・受容体複合体に集積するが、Reelin受容体のendocytosis後、Dab1は受容体から解離する、5.Dab1のチロシンリン酸化は、Reelin受容体のendocytosisの開始を制御する、以上5点を明らかにした。これら結果は、The Journal of Biological Chemistryに既に受理された。さらに、これまでに同定した新規Dab1結合タンパク質(機能など不明な為、Dab1-associated protein clone 73[DAP73]と仮に命名している)のReelinシグナルにおける役割を明らかにする目的で、培養系を用いた生化学的解析、in utero electroporationによる移動未熟ニューロンへの遺伝子導入を行い、その表現系の組織学的解析を進めた。

人们认为，细胞外基质蛋白reelin被认为可以通过诱导SRC家族酪氨酸激酶在靶神经元中表达的衔接蛋白disabeld1（DAB1）的酪氨酸磷酸化来确定神经元的位置，但是该蛋白质的详细分子机制是未知的。我假设并测试了reelin受体属于脂蛋白受体家族，该家族专门从事内吞作用，受细胞内转运的调节，因此与受体内转运有关DAB1的函数。结果，1。降低了DAB1缺乏神经元细胞表面上的reelin受体的表达，2。DAB1通过两个，3的相互作用促进reelin受体向细胞表面的转运。DAB1的相互作用。Dab1对reelin受体的亲和力在细胞表面上的reelin受体的亲和力在细胞表面上降低了4。在replation imperior sugminers receel in。 reelin受体的内吞作用，DAB1与受体分离，5。DAB1的酪氨酸磷酸化调节reelin受体内吞作用的发作。这五个点被揭示了。这些结果已经在《生物化学杂志》杂志上接受。此外，为了阐明先前鉴定的新型DAB1结合蛋白的作用（该蛋白质暂定命名为DAB1相关的蛋白质克隆73 [DAP73]，因为其功能尚不清楚），我们使用培养系统和基因转移到迁移性神经元中进行了生物化学分析，并通过Utero Extropor ofto Electoporation和Enteropolation Synecte carried Synecte carroude Synecte cartipe of the Cartote sottipe of the cartotipe。