吸血性ダニ由来新規接触相阻害物質に関する研究

新型吸血螨接触相抑制剂的研究

基本信息

批准号：
15780073
负责人：
岩永史朗
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15780073/
关键词：
吸血性ダニ接触相高分子キニノゲン血液凝固第XII因子

项目摘要

現在までに申請者はフタトゲチマダニより新規接触相阻害物質を同定し、これが高分子キニノゲン及び血液凝固第XII因子と結合し、両接触相因子が異物表面と結合するのを阻害して、接触相の活性化を阻害することを明らかとしている。平成15年度は更に接触相阻害物質が持つ2つのKunitz型タンパク質ドメイン(N-domain及びC-domainと表記)に着目し、1)N-及びC-domainともに接触相活性化阻害に関与すること、2)C-domainが接触相活性化をN-domainより強く阻害すること、3)C-domainが高分子キニノゲンの異物結合部位に特異的に結合することを明らかとした。また、接触相阻害物質単独の結晶化を試み、3種の結晶を得た。平成16年度は接触相阻害物質に関する各種変異体を作製し、阻害に必須なアミノ酸残基の同定を試みた。その結果、N-domain中ではTrp29,Leu30,Tyr31,Tyr43,Glu56,Glu60,C-domain中ではTyr85,Va186,Tyr87,Va197,Phe113,Glu117が阻害に深く関与することを明らかとした。次に接触相阻害物質の立体構造解明を試みた。平成15年度に得た3種の結晶に関し、X線結晶解析を試みたが、良好な結果を得ることができなかった。そこで、接触相阻害物質がKunitz型タンパク質であることを利用し、Molecular Operating Enviromentによる分子構造予測モデルを作製した。更に得られたモデルと変異体の実験結果を合せて考察すると、阻害に関与するアミノ酸は阻害分子表面上の一部に集中して存在することが示唆された。これにより、この接触相阻害分子はこの領域を使って標的分子と相互作用すると推定した。

迄今为止，申请人已经从tick虫中鉴定出一种新型的接触阶段抑制剂，该tick虫已显示与聚合物动力学和血液凝结因子XII结合，抑制了这两个接触相因与异物表面的结合，从而抑制了接触相的激活。 In 2003, we also focused on the two Kunitz-type protein domains (referred to as N-domain and C-domain) that contact phase inhibitors possess, and revealed that 1) both N- and C-domains are involved in inhibiting contact phase activation, 2) C-domains strongly inhibit contact phase activation than N-domains, and 3) C-domains specifically bind to the foreign body binding site of polymer动力学。此外，仅接触阶段抑制剂的结晶即可获得三种类型的晶体。 2004年，产生了与接触相抑制剂有关的各种突变体，并试图鉴定抑制作用所必需的氨基酸残基。结果，据透露，TRP29，Leu30，Tyr31，Tyr43，Glu56，Glu60和Tyr85，VA186，Tyr87，Va197，Phe113和Glu117与N-Domain中的抑制作用。接下来，我们试图阐明接触阶段抑制剂的三维结构。尝试用于2003年获得的三种晶体，但未能获得X射线晶体学。因此，我们使用了一个事实，即接触阶段抑制剂是一种Kunitz型蛋白来创建使用分子工作环境的分子结构预测模型。此外，所获得的模型和突变体的实验结果的组合表明，参与抑制作用的氨基酸部分集中在抑制分子的表面上。这假定接触阶段抑制剂分子使用该区域与目标分子相互作用。