線虫C.elegansの生殖に働くRNA結合蛋白質と関連因子の機能解析と利用

在线虫繁殖中发挥作用的RNA结合蛋白及相关因子的功能分析和利用

• 批准号: 15770139
• 负责人: 辛島 健
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770139/
• 关键词: 線虫; C.elegans; 生殖腺; 配偶子; 無精子症; RNA結合蛋白質; mRNA

1.DAZ-1蛋白質と標的mRNAとの相互作用の生理学的意義前年度に、ヒト無精子症因子DAZの線虫における相同蛋白質DAZ-1が、線虫の生殖腺内で結合するmRNAを複数同定した。本年度は、それらの中でも特に生殖腺で重要な働きをし、daz-1変異体で発現が顕著に異常であったfbf-1およびgld-1について、遺伝学的な解析を行った。その結果、daz-1遺伝子がGLD-1タンパク質の発現を既知の因子と協調的に促進することが示された。また、fbf-1と同様にdaz-1が生殖細胞の増殖・性決定に関与することが示された。2.DAZ-1蛋白質と相互作用するCPB-3の生化学的・遺伝学的解析DAZ-1蛋白質とin vivoで相互作用するものとして前年度に単離した翻訳制御因子CPB-3がin vivoで結合しているmRNAを生化学的に同定した。前年度に作製したcpd-3遺伝子欠失変異体の遺伝学的な解析結果とあわせて、cpd-3遺伝子が生殖細胞の増殖、性決定および分化の各局面で異なるmRNAに結合して機能することが示唆された。3.mRNA結合蛋白質SQD-1が結合するmRNAの包括的探索前年度に、mRNAの翻訳や局在化に重要であるSquid/hrp40蛋白質の線虫相同蛋白質SQD-1が結合するmRNAの候補を単離した。本年度は、それらのmRNAの3'UTR中からSQD-1が結合するモチーフを生化学的に同定した。線虫の核酸配列データベースから、3'UTR中にそのモチーフを持つ遺伝子を同定するプログラムを作製し、SQD-1の標的となりうるmRNAの候補をリストアップした。現在、それらのmRNAの細胞内局在を生化学的に検討している。

1. DAZ-1蛋白与靶mRNA相互作用的生理意义去年，我们鉴定了秀丽隐杆线虫性腺中人类无精子症因子DAZ的同源蛋白DAZ-1所结合的多个mRNA。 。今年，我们对fbf-1和gld-1进行了遗传分析，它们在性腺中具有特别重要的功能，并且在daz-1突变体中表达显着异常。结果表明，daz-1基因与已知因子协同促进GLD-1蛋白表达。此外，与 fbf-1 一样，daz-1 也被证明参与生殖细胞增殖和性别决定。 2.对与DAZ-1蛋白相互作用的CPB-3进行生化和遗传分析，对结合的mRNA进行生化鉴定。结合前一年创建的cpd-3基因缺失突变体的遗传分析结果，我们发现cpd-3基因在生殖细胞增殖、性别决定和分化的各个阶段通过与不同的mRNA结合来发挥作用。有人建议说。 3、全面寻找mRNA结合蛋白SQD-1结合的mRNA 去年，我们寻找了Squid/hrp40蛋白的线虫同源蛋白SQD-1结合的候选mRNA，这对于mRNA翻译和表达具有重要意义。本地化。今年，我们通过生化方法鉴定了 SQD-1 在这些 mRNA 的 3'UTR 中结合的基序。从秀丽隐杆线虫核酸序列数据库中，我们创建了一个程序来识别 3'UTR 中具有该基序的基因，并创建了可以作为 SQD-1 目标的 mRNA 候选者列表。我们目前正在通过生化方法研究这些 mRNA 的细胞内定位。