マイクロ・ナノシステムによる遺伝子解析のための核酸濃縮技術の開発

利用微/纳米系统开发用于遗传分析的核酸富集技术

基本信息

批准号：
15760585
负责人：
大河内美奈
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Nagoya University (2004)Tokyo University of Agriculture and Technology (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、マクロからミクロへのインターフェースとして電気泳動の原理を利用し核酸を濃縮する方法の開発を目的とした。具体的には、mLおよびサブmLオーダーのサンプル量から核酸を電気泳動により微少な透析膜上へ補修する技術の開発を行った。具体的には、サンプルを入れる容器に透析膜を被覆した微少スポットに、電気泳動の原理を利用して核酸を濃縮することを検討した。平成15年度において検討した核酸の濃縮条件を踏まえて96穴プレート用および電気泳動チップ用の装置を設計し、電気泳動により透析膜上に核酸を濃縮するシステムを試作した。核酸濃縮に用いた電気泳動システムを用いて、電気泳動の指標として用いられる色素であるキシレンシアノール、オレンジG、ブロモフェノールブルーなどを用いて濃縮条件を検討した。次に、濃縮用核酸ターゲットとして各種長さのssDNA、dsDNAをモデルターゲットとして電圧制御で核酸の濃縮条件を検討し、蛍光色素染色による評価を行った。試作した装置において、電解液や電解条件などの濃縮条件や核酸濃縮に用いることが可能な核酸の量や濃度などの条件を求め、試作した装置において核酸濃縮が可能であることが示された。また、電流制御においても同様に核酸の濃縮が可能であった。以上のことから、電気泳動の原理を利用し、微少な透析膜上に核酸を捕集・濃縮することが可能であると示された。これより、感染症の特定遺伝子やmRNA等、サンプル中に微量に存在する核酸を濃縮して解析することが可能となると考えられる。

这项研究旨在使用电泳原理作为从宏到微观的界面开发一种富集核酸的方法。具体而言，我们已经开发了一种技术，可以通过ML和亚ML顺序的样品体积电泳将核酸修复到小透析膜上。具体而言，我们研究了电泳原理的使用将核酸浓缩在一个透析膜中的小位置，并在放置样品的容器中覆盖。根据2003年讨论的核酸浓度条件，我们为96孔板和电泳芯片设计了一种设备，并创建了一个原型系统，用于通过电泳将核酸浓缩到透析膜上。用于核酸浓度的电泳系统用于使用二甲醇，橙色G，溴苯酚蓝色等染料的浓度条件，这些系统被用作电泳的指标。接下来，将各种长度的ssDNA和dsDNA用作富集的靶标，并在电压控制下检查了核酸的富集条件，并通过荧光染料染色评估了核酸。在原型设备中，确定了可用于核酸浓度的浓度条件，例如电解质溶液和电解条件，核酸的量和浓度被确定，并表明在原型设备中可能有可能核酸浓度。另外，在电流对照中也可能实现核酸浓度。从上面可以看出，可以使用电泳原理在微透析膜上收集和浓缩核酸。这使得可以浓缩和分析样品中存在的少量核酸，例如传染病和mRNA的特定基因。

项目成果

期刊论文数量（11）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Mina Okochi et al.: "Development of an automated water toxicity biosensor using Thiobacillus ferrooxidans for monitoring cyanides in natural water for water filtering plant"Biotechnol.Bioenerg. (in press). (2004)

Mina Okochi 等人：“利用氧化亚铁硫杆菌开发自动水毒性生物传感器，用于监测水过滤厂天然水中的氰化物”Biotechnol.Bioenerg。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Development of an automated water toxicity biosensor using Thiobacillus ferrooxidans for monitoring cyanides in natural water for water filtering plant

使用氧化亚铁硫杆菌开发自动化水毒性生物传感器，用于监测水过滤厂天然水中的氰化物

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Biotechnol.Bioeng. 87(7)
影响因子：
0
作者：
Mina Okochi et al.;Mina Okochi et al.;Mina Okochi et al.
通讯作者：
Mina Okochi et al.

松永是他: "ナノファイバーテクノロジーを用いた高度産業発掘戦略(応用編第5章 2節バイオチップを分担執筆)"シーエムシー出版. 457 (2004)

Kore Matsunaga 等人：“利用纳米纤维技术的先进工业发现策略（应用版本，第 5 章，第 2 节：生物芯片）”CMC Publishing 457 (2004)。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

ナノファイバーテクノロジーを用いた高度産業発掘戦略(第5章分担執筆)

使用纳米纤维技术的先进工业发现策略（第5章合著者）

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
影响因子：
0
作者：
松永是;大河内美奈
通讯作者：
大河内美奈

Kinetics and binding sites for interaction of prefoldin with group II chaperoinn : contiguous nonnative substrate and chaperonin binding sites in archaeal prefoldin

前折叠蛋白与 II 组伴侣相互作用的动力学和结合位点：古细菌前折叠蛋白中的连续非天然底物和伴侣蛋白结合位点

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J.Biol.Chem. 279(30)
影响因子：
0
作者：
Mina Okochi et al.;Mina Okochi et al.;Mina Okochi et al.;Jun-ichi Akutsu et al.;Mina Okochi et al.
通讯作者：
Mina Okochi et al.