肺癌の5p13増幅領域における標的遺伝子SKP2のアンチセンス法による増殖抑制

目的基因SKP2反义法抑制肺癌5p13扩增区增殖

• 批准号: 03J61539
• 负责人: 石原 左奈 (横井 左奈)
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J61539/
• 关键词: 肺癌; 5p13; 遺伝子増幅; skp2; アンチセンス

1.肺小細胞癌におけるSKP2発現抑制アンチセンス処理により細胞増殖が抑制される時に、DNAの合成能の低下に加え核の断片化が起きていることを明らかにした。FACSによるsub-G1分画の増加およびcaspase-3活性上昇も認め、SKP2の発現抑制によりアポトーシスが誘導されることを示した(Yokoi S Cancer Sci.2003)。この時に発現が変化する遺伝子群をcDNA発現アレイを用いて網羅的に解析した。有意にup-regulateされる遺伝子は124種類、down-regulateされる遺伝子は204種類抽出され、real-time RT-PCR法で検証した。同様にsiRNAを用いたSKP2発現抑制も行い、SKP2に特異的な変化に絞り込むべく検討を行っている。2.非小細胞肺癌におけるSKP2の遺伝子増幅・発現亢進非小細胞癌細胞株のCGH解析においても5p13領域のDNAコピー数の増加は高頻度に認められ、SKP2の増幅と発現亢進に相関を認めた。臨床検体では非腫瘍部と比較し腫瘍部が高値を示した。また、リンパ節転移陽性例はSKP2発現高値群に有意に多く認められた。SKP2のアンチセンス処理により細胞の遊走能、浸潤能はどちらも抑制され、SKP2が転移を促進している可能性を示した(Yokoi S投稿中)。3.非小細胞癌における増幅領域3q26前述の肺非小細胞癌細胞株のCGH解析の結果、最も高頻度の増幅は3q26に検出された。3q26の標的遺伝子は多数報告されているが、中でもテロメア鋳型RNAであるTERCにおいて増幅と発現に強い相関を認め、テロメラーゼ活性も上昇していた。臨床検体の検討からもTERCの発現が非腫瘍部に比較し腫瘍部において特に亢進していた(Yokoi S Clinic Cancer Res 2003)。

1.小细胞肺癌中SKP2表达的抑制我们发现，当反义处理抑制细胞增殖时，除了DNA合成能力下降之外，还发生核断裂。通过FACS还观察到亚G1部分的增加和caspase-3活性的增加，表明SKP2表达的抑制诱导细胞凋亡（Yokoi S Cancer Sci.2003）。我们利用cDNA表达芯片全面分析了此时表达发生变化的基因组。我们提取了124个显着上调的基因和204个下调的基因，并使用实时RT-PCR对其进行验证。同样，我们也在使用 siRNA 抑制 SKP2 表达，并正在进行一项研究以缩小 SKP2 特异性变化的范围。 2. 非小细胞肺癌中基因扩增和 SKP2 表达增加 在非小细胞癌细胞系的 CGH 分析中经常观察到 5p13 区域 DNA 拷贝数的增加，并且发现 SKP2 扩增与 SKP2 表达增加之间存在相关性。表达增加。在临床样本中，与非肿瘤区域相比，肿瘤区域显示出更高的水平。此外，SKP2高表达组淋巴结转移阳性病例明显增多。 SKP2 的反义处理抑制了细胞迁移和侵袭能力，表明 SKP2 可能促进转移（Yokoi S 正在进行中）。 3.非小细胞癌中的3q26扩增区域根据上述对肺非小细胞癌细胞系的CGH分析的结果，在3q26中检测到最频繁扩增的区域。尽管3q26的许多靶基因已被报道，但观察到端粒模板RNA TERC的扩增和表达之间存在很强的相关性，并且端粒酶活性也增加。对临床标本的检查还表明，与非肿瘤区域相比，肿瘤区域的 TERC 表达尤其升高（Yokoi S Clinic Cancer Res 2003）。

项目成果

Yokoi S: "TERC is a probable target for gene amplification at 3q26 in non-small cell lung cancers"Clinical Cancer Research. 15. 4705-4713 (2003)

Yokoi S：“TERC 可能是非小细胞肺癌 3q26 基因扩增的靶点”临床癌症研究。

Yokoi S: "Down-regulation of SKP2 induces apoptosis in lung-cancer cells"Cancer Science. 94. 344-349 (2003)

Yokoi S：“SKP2 的下调诱导肺癌细胞凋亡”《癌症科学》。