プリオン病における赤芽球系因子AHSP/EDRF発現変動の分子基盤

朊病毒疾病中红细胞因子AHSP/EDRF表达变化的分子基础

• 批准号: 03J52011
• 负责人: 伊東 大介
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J52011/
• 关键词: AHSP; EDRF; プリオン; BSE; 転写調節; GATA-1; 赤芽球; 生前診断法; 品質管理

本研究は、BSE感染スクリーニングの間接的手法開発を目指し、その基盤となるAHSP発現変化の分子機構解明を目的としている。1.赤芽球系細胞モデルとしてPrP^cとAHSPの両者を発現するMEL細胞を選定し、分化誘導により高率に赤芽球系分化を示すサブクローンMEL hide8を単離した。2.MEL hide8細胞を用いてマウスPrP^cを大量発現するMEL hide8-MoPrP細胞を作製し、プリオン感染マウス由来脳乳剤またはPrP^<sc>持続感染神経細胞株(ScN2a)存在下に培養し赤芽球系分化誘導を行ったところ、AHSPならびにGATA-1、EKLFなどの赤芽球系特異的転写因子の発現動態に影響は認められなかった。また、同細胞を用いて、未分化前駆細胞にPrP^<sc>が蓄積するかどうか長期的影響も検討した。その結果、対照として用いたN2a-MoPrP細胞にはPrP^<sc>の蓄積が観察されたが、MEL hide8-MoPrPにはPrP^<sc>の蓄積は認められなかった。3.マウスAHSP遺伝子の5'上流領域2.4kbを単離しMEL hide8細胞でのプロモーター活性を解析した。その結果、赤芽球系分化誘導時には、転写開始点の上流-120から-50bpの領域の存在がAHSPの転写活性化に最も重要なことが判明した。この領域にはウシ、マウス、ヒトで共通にGATA認識配列が存在することから、AHSPの発現にGATAによる転写制御が関連することが推定された。さらにプリオン病関連サイトカインIL-1β、IL-6存在下にMEL hide8細胞を用いて、AHSP遺伝子プロモーター活性を測定したところ、プロモーター活性は減少した。以上のことから、プリオン感染動物におけるAHSP発現低下には、異常型プリオンが直接に赤芽球細胞の分化に影響を与えるのではなく、サイトカインなどの間接的な因子の関与が示唆された。

这项研究旨在开发一种间接的BSE感染筛查方法，并阐明AHSP表达变化的分子机制，这是这样做的基础。 1。选择同时表达PRP^C和AHSP的MEL细胞作为红细胞细胞系的模型，MEL HIDE8通过诱导分化分离出表现出很高的红细胞分化速率的MEL HIDE8。 2。使用MEL HIDE8细胞制备了表达大量小鼠PRP^C的MEL HIDE8-MOPRP细胞，并在存在来自受prion感染的小鼠或PRP^<sc>持续感染的神经元细胞系（SCN2A）的脑乳液中培养，以诱导成肌细胞分化。未观察到对AHSP和红细胞特异性转录因子（例如GATA-1和EKLF）的表达动力学的影响。此外，还研究了使用相同细胞在未分化的祖细胞中积累在未分化的祖细胞中的长期影响。结果，在用作对照的N2A-MOPRP细胞中观察到PRP^<sc>的积累，但是在MEL HIDE8-MOPRP中未观察到PRP^<sc <SC>积累。 3。分离了小鼠AHSP基因的5'上游区域，并分析了MEL HIDE8细胞中的启动子活性。结果，发现在诱导红细胞系统分化时，AHSP转录激活的转录起源中上游的区域从-120到-50 bp。由于GATA识别序列通常存在于该区域中的牛，小鼠和人类中，因此据估计，GATA的转录调控与AHSP表达有关。此外，当使用与疾病疾病相关的细胞因子IL-1β和IL-6的情况下使用MEL HIDE8细胞时，启动子活性降低。从上面的情况下，提出，临床感染动物的AHSP表达的降低不会直接影响红细胞细胞的分化，但是间接因素（例如细胞因子）参与prion感染的动物中AHSP表达的降低。