放線菌におけるA-factor制御カスケードの解明

放线菌中 A 因子调控级联的阐明

基本信息

批准号：
03J11830
负责人：
加藤淳也
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、放線菌Streptomyces griseusにおけるA-ファクター制御カスケードの起点である、A-ファクターの生合成機構についての研究を中心に行った。まず、A-ファクター生合成変異株のスクリーニングをA-ファクターによる形質(形態分化)を指標にUV変異株10,000株より行ったが、これまで生合成酵素をコードする遺伝子と予想されているafsA領域以外には生合成に関与する変異を取得することができなかった。afsA単一の遺伝子破壊株を作製すると確かにA-ファクター欠損変異株となることを確認した。そこでいまだに不明のままであるAfsA蛋白質の機能解明を目的として大腸菌における発現の検討を行い、発現に成功した。AfsAを発現した大腸菌の培養上清にはA-ファクター活性があることをA-ファクター欠損株(afsA遺伝子破壊株)を用いたバイオアッセイおよび機器分析により確認、解析した。現在、精製したAfsA蛋白質および生合成予想経路に基づいた基質を用いてin vitro反応を行うことにより、A-ファクター生合成におけるAfsA蛋白質の寄与を明らかにしようと詳細に検討を行っているところである。また、昨年度に行ったカスケードの中心的転写活性化因子AdpAの自己抑制機構、放線菌S.coelicolor A3(2)におけるSSIファミリープロテアーゼ阻害蛋白質の解析について論文にまとめ発表した。昨年度から続けているS.griseusのSSIファミリープロテアーゼ阻害蛋白質SgiAについても解析を続けた。SgiAはAdpAによる直接的転写活性化により発現がおこるという、A-ファクターによる制御を証明し、さらに大腸菌により発現、精製したSgiAの添加により放線菌の分化が遅れるという、形態分化への寄与についてもほぼ明らかにしており、現在論文投稿準備中である。

今年，我们专注于研究A因子的生物合成机制，这是放线菌菌群中A因子控制级联的起点。首先，筛选了A因子生物合成突变体，以使用A因子作为指示器使用特征（形态学分化）作为指示剂，以筛选A因子生物合成突变菌株，但可以获得生物合成的突变，除了AFSA区域外，AFSA地区以前是AFSA地区，预计该基因是构造了sene endene en e sene en e sene en en eene en eene en eens en e eNtodic en eNTODENTICENTICENTHETIC ENTODENTICENTICENTHETIC ENDETIC ENDETIC。我们证实，AFSA的单个基因破坏菌株确实是A因子缺陷的突变体。因此，为了阐明AFSA蛋白的功能（尚不清楚），我们研究了其在大肠杆菌中的表达，并成功表达了它。通过生物测定法和使用A因子缺陷型菌株（AFSA基因破坏菌株）确认并通过生物测定和仪器分析来证实并分析表达AFSA的大肠杆菌的培养上清液。目前，正在进行详细的研究，以阐明AFSA蛋白在A因子生物合成中的贡献，该研究通过使用纯化的AFSA蛋白和底物进行体外反应，基于预测的生物合成途径。此外，去年，我们已经汇编并介绍了一篇论文，介绍了放线菌Coelicolor A3（2）中SSI家族蛋白酶抑制蛋白的分析，这是ADPA的自动透明机制，ADPA的自动性转录激活剂，级联反应剂的中心转录激活剂，以及SSI家族蛋白酶蛋白酶抑制蛋白抑制性蛋白质蛋白在cotinosemotorcete s.coericete s.coeloricorcetor s.coelicoricoricoricoricolicoricoricoricolicoricolicoricolicoricolicora a3 cocoiCoricoricora a3（我们还继续分析S.Griseus的SSI家族蛋白酶抑制剂SGIA，该蛋白质自去年以来一直在运行。 SGIA已证明它是由A因子控制的，ADPA通过ADPA直接转录激活表达，它还揭示了对形态学分化的贡献，例如大肠杆菌和纯化的Sgia延迟分化的静脉脱肌的添加，目前正准备提交论文。