合成抗原を用いたシガテラ毒検定法とワクチンの開発

使用合成抗原开发雪卡毒素测定和疫苗

基本信息

批准号：
03J07200
负责人：
佐々木信也
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

シガトキシン類は、珊瑚礁海域の魚介類の摂取によって引き起こされる食中毒シガテラの主要原因毒である。シガテラ中毒患者は毎年2万人以上発生している世界最大規模の食中毒である。シガトキシン類は天然から非常に微量しか採集できないため、毒性発現機構解明や中毒予防法開発の研究は立ち後れている。私は、化学合成によるシガトキシン類の供給と、抗体調製による毒魚検定法の開発を目指し、研究を開始した。まず、既知法によってCTX3CのABCD環を合成した。続いて、私が最適化した方法によりA環側鎖を導入しシガトキシン型ABCD環へと変換した、これを、リンカーを介してキャリアー蛋白質と連結して、抗体調製用ABCD抗原を合成できた。また、当研究室で合成されたシガトキシンおよびCTX3CのHIJKLM環をそれぞれ同様にキャリアー蛋白質と連結して抗原を合成した。これらの抗原を用いて、抗体の調製を検討中である。また、当研究室は、CTX3CのABCDE環およびIJKLM環を有する抗原から調製した2種のモノクローナル抗体を用いて、CTX3C検出用ELISAキットを開発した。私は、この検出キットのCTX3Cに代わる陽性コントロール試薬として、CTX3CのABCD環とIJKLM環を両方有する蛋白質コンジュゲートを合成した。このコンジュゲートのマウス急性毒性は極めて低かった(>38mg/kg)。また、上記ELISA法による検出試験で陽性を示し、その検出限界は約5ng/mLであった。従って、安全かつ高感度な陽性コントロール試薬を調製できた。続いて、実際の毒魚からのCTX3C検出への応用を目指し、モデル実験として魚の切り身に予めCTX3Cを混入した試料からの抽出・検出試験を行った。その結果、抽出物をメタノール溶液としたときに感度よく検出できた。これにより、シガテラ毒魚からのCTX3Cを検出できる可能性が示されたと言える。

雪卡毒素是导致食物中毒的主要原因，雪卡毒素是由于摄入来自珊瑚礁地区的海鲜而引起的。雪卡中毒是世界上最大的食物中毒疾病，每年发生2万多例。由于雪卡毒素只能从自然界中采集极少量，因此阐明其毒性机制和开发预防中毒方法的研究相对滞后。我开始研究的目的是通过化学合成提供雪卡毒素，并开发使用抗体制剂的毒鱼检测方法。首先，通过公知的方法合成CTX3C的ABCD环。接下来，我用我优化的方法引入了A环的侧链，将其转化为雪卡毒素型ABCD环，然后通过连接子与载体蛋白连接，合成ABCD抗原用于抗体制备。此外，通过以相同的方式将本实验室合成的雪卡毒素和CTX3C的HIJKLM环与载体蛋白连接来合成抗原。我们目前正在研究使用这些抗原制备抗体。此外，我们实验室使用含有CTX3C的ABCDE环和IJKLM环的抗原制备的两种单克隆抗体开发了检测CTX3C的ELISA试剂盒。我合成了一种同时含有 CTX3C 的 ABCD 环和 IJKLM 环的蛋白缀合物作为阳性对照试剂，以替代该检测试剂盒中的 CTX3C。该结合物对小鼠的急性毒性极低（>38 mg/kg）。另外，采用上述ELISA方法进行的检测试验显示阳性结果，检测限约为5ng/mL。因此，可以制备安全且高灵敏度的阳性对照试剂。接下来，为了将该方法应用于实际有毒鱼中CTX3C的检测，我们以预先混合CTX3C的鱼片样品作为模型实验进行了提取和检测试验。结果，当将提取物制成甲醇溶液时，可以以高灵敏度进行检测。这可以说证明了从雪卡毒鱼中检测CTX3C的可能性。