合成抗原を用いたシガテラ毒検定法とワクチンの開発

使用合成抗原开发雪卡毒素测定和疫苗

基本信息

批准号：
03J07200
负责人：
佐々木信也
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

シガトキシン類は、珊瑚礁海域の魚介類の摂取によって引き起こされる食中毒シガテラの主要原因毒である。シガテラ中毒患者は毎年2万人以上発生している世界最大規模の食中毒である。シガトキシン類は天然から非常に微量しか採集できないため、毒性発現機構解明や中毒予防法開発の研究は立ち後れている。私は、化学合成によるシガトキシン類の供給と、抗体調製による毒魚検定法の開発を目指し、研究を開始した。まず、既知法によってCTX3CのABCD環を合成した。続いて、私が最適化した方法によりA環側鎖を導入しシガトキシン型ABCD環へと変換した、これを、リンカーを介してキャリアー蛋白質と連結して、抗体調製用ABCD抗原を合成できた。また、当研究室で合成されたシガトキシンおよびCTX3CのHIJKLM環をそれぞれ同様にキャリアー蛋白質と連結して抗原を合成した。これらの抗原を用いて、抗体の調製を検討中である。また、当研究室は、CTX3CのABCDE環およびIJKLM環を有する抗原から調製した2種のモノクローナル抗体を用いて、CTX3C検出用ELISAキットを開発した。私は、この検出キットのCTX3Cに代わる陽性コントロール試薬として、CTX3CのABCD環とIJKLM環を両方有する蛋白質コンジュゲートを合成した。このコンジュゲートのマウス急性毒性は極めて低かった(>38mg/kg)。また、上記ELISA法による検出試験で陽性を示し、その検出限界は約5ng/mLであった。従って、安全かつ高感度な陽性コントロール試薬を調製できた。続いて、実際の毒魚からのCTX3C検出への応用を目指し、モデル実験として魚の切り身に予めCTX3Cを混入した試料からの抽出・検出試験を行った。その結果、抽出物をメタノール溶液としたときに感度よく検出できた。これにより、シガテラ毒魚からのCTX3Cを検出できる可能性が示されたと言える。

sigatoxins是珊瑚礁水中海鲜引起的食物中毒Cigatera的主要原因。 Cigatera中毒是世界上最大的食物中毒，每年有20,000多人经历。由于CIGATOXIN只能从自然界中以很少的数量收集，因此研究阐明毒性发展的机制和开发预防中毒的方法是幕后的。我已经开始研究，目的是通过化学合成来供应CIGATOXIN，并开发一种使用抗体制备进行有毒鱼类测试的方法。首先，通过已知方法合成CTX3C的ABCD环。接下来，我使用我优化的方法引入了A形侧链，并将其转换为CIGATOXIN型ABCD环，并通过接头将其链接到载体蛋白，以合成用于抗体制备的ABCD抗原。此外，在我们实验室中合成的CIGATOXIN和CTX3C的HIJKLM环分别与载体蛋白相似地与合成抗原合成。使用这些抗原研究了抗体的制备。此外，我们的实验室开发了一种ELISA试剂盒，使用用ABCDE环和CTX3C的IJKLM环制备的两种单克隆抗体检测CTX3C。我将CTX3C的ABCD和IJKLM环作为阳性对照试剂合成蛋白结合物，以替代此检测试剂盒中的CTX3C。该结合物的急性毒性极低（> 38 mg/kg）。此外，使用ELISA方法的检测测试显示阳性结果，检测极限约为5 ng/ml。因此，可以制备安全有灵敏的阳性对照试剂。接下来，作为模型实验，我们从样品中进行了提取和检测试验，在该样品中，以前在鱼片中将CTX3C与CTX3C混合。结果，当提取物用作甲醇溶液时，可以以高灵敏度检测到它。可以说这表明可以从雪茄毒鱼中检测到CTX3C。