担子菌ウシグソヒトヨタケの子実体形成に関する突然変異株の分子遺伝学的解析

担子菌子实体形成相关突变株的分子遗传学分析

• 批准号: 03J02545
• 负责人: 寺島 和寿
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J02545/
• 关键词: 担子菌; きのこ; ウシグソヒトヨタケ; 子実体形成; 光形態形成; 青色光受容体; LOVドメイン; PASドメイン

1 子実体の光形態形成に関わる遺伝子dst1の遺伝子破壊の試みdst1の5'非コード領域(約3kb)-ハイグロマイシンB耐性遺伝子(hph)-dst1の3'非コード領域(約3kb)を含むプラスミドを用い、野生株(#326)を形質転換し、相同組み換えを利用したdst1の遺伝子破壊を試みた。形質転換により得られたハイグロマイシン耐性株466株のdst1をコロニーPCRにより調べた結果、dst1遺伝子破壊株は見つからなかった。しかしながら、これらのハイグロマイシン耐性株の中から、光形態形成異常を示す株3株(dst#2,dst#53,dst#106)が見つかった。また、dst#2の変異遺伝子は相補性検定から、dst1遺伝子であることが示唆されたが、この変異株のdst1遺伝子の塩基配列を決定したところ変異が発見できなかった。2 子実体の光形態形成に関わる遺伝子dst2の分子遺伝学解析dst2が座乗していると思われる第五染色体の染色体コスミドライブラリーからdst2変異を相補するコスミドクローンの検索を行った。384個のコスミドクローンを用いてdst2変異株を形質転換した結果、Plate5のF8クローンによりdst2変異が部分的に相補されることがわかった。3 子実体形成に関する新規の突然変異株の作出変異遺伝子がタギングされた突然変異株の作出を効率よく行うために、ウシグソヒトヨタケでのアグロバクテリウムを利用した形質転換を試みた。ヒトヨタケの薬剤耐性マーカーとしてハイグロマイシン耐性遺伝子を持つプラスミドを構築し、アグロバクテリウムのC58C1株を用いて実験を行った。その結果、平均0.7株/1プレートのハイグロマイシン耐性の形質転換株が得られた。しかしながら、PEG法による形質転換効率(10〜20株/1プレート)に比べて非常に形質転換効率が低く、アグロバクテリウムを利用した形質転換法は、ウシグソヒトヨタケの子実体形成に関する新規突然変異株の作出には適さないことがわかった。

1试图破坏DST1的基因，DST1的基因参与了水果体的光形态发生。 DST1的5'非编码区（约3 kb）的质粒 - 3'非编码区（约3 kb）DST1用于转化野生应变（＃326），并试图使用同源重组来破坏DST1的基因。通过Colony PCR检查了通过转化获得的466个耐毒素抗性菌株的DST1，没有发现DST1基因破坏。然而，在这些抗湿霉素菌株中，发现了三种表现出光塑料发生的菌株（DST＃2，DST＃53，DST＃106）。此外，互补测试表明，DST＃2的突变基因是DST1基因，但是当确定该突变株的DST1基因的基本序列时，未发现突变。 2对成果体的DST2基因的分子遗传分析，我们搜索了宇宙克隆，这些克隆补充了从5号染色体的染色体宇宙库中的DST2突变，其中DST2似乎在该基因座中。用384个宇宙克隆转化DST2突变株，表明Plate5的F8克隆部分补充了DST2突变。 3创建新型突变体以进行果实的身体形成，以便用用突变基因标记的突变基因有效地产生突变菌株，我们试图在日本糖中使用农杆菌转化。具有湿霉素耐药基因的质粒在人Yotake中作为耐药性标记构建，并使用农业菌株C58C1进行了实验。结果，平均获得0.7菌株/1板，获得了耐毒素的转化体。然而，与PEG方法（10-20菌株/1板）相比，转化效率非常低，发现使用农杆菌的转化方法不适用于生产新型突变体，用于在牛窝中生效身体形成。