四肢発生時の間充織凝集パターンを調節する膜蛋白質相互作用の解析

分析肢体发育过程中调节间充质聚集模式的膜蛋白相互作用

• 批准号: 14780563
• 负责人: 和田 直之
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kawasaki Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780563/
• 关键词: 肢芽; パターン形成; 細胞間認識; ephrin-A2; EphA4; 軟骨分化

四肢骨格の基本パターンは,四肢原基(肢芽)を構成する間充織細胞が形成する凝集パターンとして作られる。本研究では凝集パターンを制御する分子として,受容体型チロシンキナーゼのEphAと,膜結合型リガンドのephrin-Aの相互作用に注目し,間充織の凝集過程および軟骨分化過程における役割を検討した。本研究課題を開始する段階で,ephrin-A2が肢芽の近遠軸方向の位置特異性を反映することがわかっていたため,まずephrin-A2に注目して解析を進めた。強制発現系を用いて肢芽遠位でephrin-A2を異所的に発現させ,発生させた。その結果,手部や足部などの遠位骨格に影響が起こり,過剰指や部分的な融合骨を持つ個体が数例観察された。ephrin-A2過剰発現の影響を詳細に検討するために,培養系を用いた解析を行った結果,ephrin-A2の過剰発現は手部や足部など遠位構造を作る間充織(遠位間充織)の接着性を特異的に変化させた。また,ephrin-A2過剰発現は軟骨分化そのものには影響しなかったが,主に遠位間充織が形成する軟骨結節(凝集した細胞が形成する軟骨塊)の形成を抑制した。そのため,過剰発現したephrin-A2は遠位構造を作る間充織の接着性を変化させ,軟骨凝集形成過程に影響すると考えられた。一方,EphAやephrin-Aには複数の分子種があるため,複数のEphA-ephrin-A相互作用を一括して阻害する蛋白質(EphAやephrin-Aの細胞外領域とHuman lgGのFc領域との融合蛋白質)を培養系に添加し,軟骨分化への影響を観察した。その結果,ephrin-A2-Fcを添加すると軟骨結節形成が抑制された。Ephrin-A2-FcはEphAの機能阻害を行うので,軟骨結節形成過程には間充織で発現するephrin-A2とその受容体の相互作用が関与すると考えられた。以上より,ephrin-A2とその受容体は,正常四肢発生過程においても,肢芽間充織の接着性を遠近軸に沿って変化させ,細胞の凝集パターン,ひいては軟骨パターンを調節すると考えられた。

肢体骨骼的基本模式是由构成肢体底座（肢体芽）形成的骨料模式创建的。在这项研究中，作为控制聚集模式的分子，我们专注于受体酪氨酸激酶的EPHA与膜型配体的Ephrin-A之间的相互作用，并检查了聚集过程中的作用与软骨分化过程中的作用Mitsuramo。在本研究主题的开头，众所周知，ephrin-A2反映了肢体芽的近轴方向的位置特异性，因此我们首先专注于ephrin-a2并进行了分析。使用强制表达系统，在远处的肢体中表达ephrin-A2并生成。结果，远处的骨骼（例如手和脚）受到影响，有几个手指过多的人和部分融合骨头。为了通过分析培养系统进行分析，详细地检查了Ephrin-A2过量生产的效果，ephrin-A2的过度表达是Mitsuru（远处（远处结构），它会产生远端结构，例如手和脚Mitsuro的粘合性（三菱矿石）已被特异性改变。此外，尽管ephrin-A2过度表达不影响软骨本身，但主要由远处索伦形成的软骨结节（由聚集细胞形成的软骨块）的形成被抑制。因此，过度的ephrin-A2被认为会改变编织编织的粘合性，同时创建远端结构并影响软骨聚集的加工过程。另一方面，Epha和Ephrin-A具有多种分子物种，因此抑制批量抑制多种epha-磷蛋白A相互作用的蛋白质（Epha和Ephrin-a和Human LGG的FC区域。观察到培养系统以及对软骨分化的影响。结果，抑制了ephrin-A2-FC的添加。由于ephrin-a2-fc抑制了Epha功能，因此人们认为以临时和织造表达的ephrin-a2之间的相互作用及其在软骨结节形成过程中的受体。从上面，即使在正常的肢体生成过程中，ephrin-A2及其受体也会改变肢体芽的粘附性，然后调整细胞聚集模式，然后调整软骨模式。