神経特異的RNA結合蛋白質による正常神経発生および腫瘍発生の制御機構の解明

神经元特异性RNA结合蛋白阐明正常神经发生和肿瘤发展的控制机制

基本信息

批准号：
14770372
负责人：
赤松和土
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770372/
关键词：
Hu ELAV 神経幹細胞 RNA結合タンパク質ノックアウトマウス

项目摘要

1.神経特異的RNA結合蛋白質HuDの機能解析神経細胞特異的RNA結合蛋白質HuD欠損マウスを作成し、その表現系を解析した。HuD欠損マウスは胎生10日目頃に一過性の神経発生遅延を示したが、その表現系は胎生後期以降は消失した。胎生後期以降は大きな組織構築異常を認めなかったが、Rotarod試験では成体の運動機能に有意な異常を示した。一方、胎生14目大脳皮質から採取した細胞をneurosphere法により培養すると、神経幹細胞のコロニーは増加し、これらの細胞を分化誘導すると野生型よりニューロンを産生する細胞が少なかった。BrdU, IdU2重標識組織切片によっても同時期の同部位での細胞周期からの離脱が阻害されている所見を得た。しかしながら脳室周囲での細胞死が亢進しており、結果的に神経細胞の数量的な異常が殆どもたらされなかったと推測された。これらの所見は我々が過剰発現の系を用いて以前に報告した、Huタンパク質がほ乳類の神経分化を促進する機能があるという結果を裏付ける物であり、個体におけるHu蛋白質の機能解析の第1例として現在論文を投稿中である。2.神経特異的RNA結合蛋白質HuBの機能解析HuBは神経細胞の分化過程でHuDよりも早期に発現するタンパク質である。強制発現を用いた我々の以前の実験から、Huファミリーは共通して神経分化誘導機能を有することが推測されていた。我々はHuB欠損マウスを作成し、HuDと同様に解析を行った。驚きべきことにHuB欠損マウスの神経前駆細胞の分化は亢進、分裂は減少というHuDとは全く逆の表現系を示した。我々はHuBのスプライシング同位体の相対的発現が未分化な神経幹細胞で増加していることを明らかにした。この変異体は強制発現では神経分化誘導機能はなく、むしろ細胞の増殖を促進することが示唆された。このように神経特異的RNA結合タンパク質Huは、スプライス変異体を用いて多岐的に神経分化に関与しているということが示唆された。

1.神经元特异性RNA结合蛋白HuD的功能分析我们创建了缺乏神经元特异性RNA结合蛋白HuD的小鼠并分析了它们的表达系统。 HuD缺陷小鼠在胚胎第10天左右表现出短暂的神经发生延迟，但这种表型从胚胎后期开始消失。胚胎后期后没有观察到主要的组织结构异常，但转棒测试显示成人运动功能存在显着异常。另一方面，当使用神经球法培养从第14个胚胎的大脑皮层收集的细胞时，神经干细胞集落的数量增加，并且当这些细胞被诱导分化时，产生神经元的细胞比野生型更少。 BrdU和IdU双标组织切片也显示，同一时间点的细胞周期退出受到抑制。但推测脑室周围区域的细胞死亡加速，导致神经细胞几乎没有数量异常。这些发现支持了我们之前使用过表达系统报道的结果，即Hu蛋白具有促进哺乳动物神经分化的功能，并且是Hu蛋白在个体中进行功能分析的第一个例子，目前正在提交一篇论文。。 2、神经特异性RNA结合蛋白HuB的功能分析 HuB是神经细胞分化过程中早于HuD表达的蛋白。从我们之前使用强制表达的实验推断，Hu家族具有诱导神经分化的共同功能。我们创建了 HuB 缺陷小鼠并以与 HuD 相同的方式对其进行分析。令人惊讶的是，HuB 缺陷小鼠的神经祖细胞表现出分化增强和分裂减少，这与 HuD 完全相反。我们发现，HuB 剪接同位素的相对表达在未分化的神经干细胞中增加。提示该突变体的强制表达不具有诱导神经分化的功能，而是促进细胞增殖。这些结果表明神经元特异性 RNA 结合蛋白 Hu 使用剪接变体以多种方式参与神经元分化。