神経特異的RNA結合蛋白質による正常神経発生および腫瘍発生の制御機構の解明

神经元特异性RNA结合蛋白阐明正常神经发生和肿瘤发展的控制机制

基本信息

批准号：
14770372
负责人：
赤松和土
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770372/
关键词：
Hu ELAV 神経幹細胞 RNA結合タンパク質ノックアウトマウス

项目摘要

1.神経特異的RNA結合蛋白質HuDの機能解析神経細胞特異的RNA結合蛋白質HuD欠損マウスを作成し、その表現系を解析した。HuD欠損マウスは胎生10日目頃に一過性の神経発生遅延を示したが、その表現系は胎生後期以降は消失した。胎生後期以降は大きな組織構築異常を認めなかったが、Rotarod試験では成体の運動機能に有意な異常を示した。一方、胎生14目大脳皮質から採取した細胞をneurosphere法により培養すると、神経幹細胞のコロニーは増加し、これらの細胞を分化誘導すると野生型よりニューロンを産生する細胞が少なかった。BrdU, IdU2重標識組織切片によっても同時期の同部位での細胞周期からの離脱が阻害されている所見を得た。しかしながら脳室周囲での細胞死が亢進しており、結果的に神経細胞の数量的な異常が殆どもたらされなかったと推測された。これらの所見は我々が過剰発現の系を用いて以前に報告した、Huタンパク質がほ乳類の神経分化を促進する機能があるという結果を裏付ける物であり、個体におけるHu蛋白質の機能解析の第1例として現在論文を投稿中である。2.神経特異的RNA結合蛋白質HuBの機能解析HuBは神経細胞の分化過程でHuDよりも早期に発現するタンパク質である。強制発現を用いた我々の以前の実験から、Huファミリーは共通して神経分化誘導機能を有することが推測されていた。我々はHuB欠損マウスを作成し、HuDと同様に解析を行った。驚きべきことにHuB欠損マウスの神経前駆細胞の分化は亢進、分裂は減少というHuDとは全く逆の表現系を示した。我々はHuBのスプライシング同位体の相対的発現が未分化な神経幹細胞で増加していることを明らかにした。この変異体は強制発現では神経分化誘導機能はなく、むしろ細胞の増殖を促進することが示唆された。このように神経特異的RNA結合タンパク質Huは、スプライス変異体を用いて多岐的に神経分化に関与しているということが示唆された。

1。创建神经元特异性RNA结合蛋白HUD小鼠的功能分析，并分析其表达系统。 HUD缺陷小鼠在胚胎生命的第10天后显示出短暂的神经发生延迟，但它们的表型在晚期胚胎生命后消失。晚期胎儿阶段后未观察到组织构建的主要异常，但是rotarod检验显示成人运动功能的明显异常。另一方面，当使用神经圈方法培养从胚胎第14大脑皮层的脑皮质收集的细胞时，神经干细胞的数量增加，当这些细胞被诱导的分化时，与野生类型相比，神经元产生的细胞更少。我们还发现，BRDU和IDU双标记的组织切片同时抑制了同一部位的细胞周期分离。但是，据估计，心室周围的细胞死亡增加，导致神经元几乎没有定量异常。这些发现支持了先前报道的结果，我们有能力促进哺乳动物的神经分化，目前，我们将论文作为个体中HU蛋白功能分析的第一个例子。 2。神经元特异性RNA结合蛋白轮毂的功能分析是一种蛋白质，在神经元分化过程中比HUD提前表达。我们以前使用强制表达的实验表明，HU家族通常诱导神经分化的功能。我们创建了枢纽缺陷小鼠，并以与HUD相同的方式进行了分析。令人惊讶的是，枢纽缺陷小鼠中神经祖细胞的分化增强并减少了分裂，这与HUD完全相反。我们发现，在未分化的神经干细胞中，枢纽的剪接同位素的相对表达增加。该突变体在强迫表达时没有功能诱导神经分化，这表明它促进了细胞增殖。因此，建议使用剪接突变体参与多种神经元分化。