心筋炎惹起T細胞株への治療遺伝子導入による新しい心臓病治療

通过将治疗基因引入心肌炎诱导 T 细胞系来治疗新的心脏病

基本信息

批准号：
14770329
负责人：
猪又孝元
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770329/
关键词：
心筋炎遺伝子治療

项目摘要

1)これまでに確立した心筋炎惹起性T細胞株はCM2ペプチドの抗原刺激で得られたbulk cultufe株のみである。そこで、目的遺伝子担体としての細胞株の均一化、すなわちクローン化を目指す必要が生じていた。そこで、まず段階希釈法に基づく細胞株のクローン化を試みた。しかしながら、繰り返しの抗原刺激を必要とする一方で、細胞株は容易に心筋炎発症能を低下させることが判明したため、同法によるクローン化を断念した。2)マウスIL-10遺伝子のGFP発現レトロウイルスベクター(pLEGFP-N1,CLONTECH)に導入に成功した。このベクターはNIH3T3などの接着細胞には容易にトランスフェクトし、目的蛋白を発現することは確認できた。しかし最終目的であるCM2特異的心筋炎惹起T細胞株へのトランスフェクトはきわめて困難であり、(1)低速遠心、(2)共培養、(3)ウイルス産性の純化、を通じて遺伝子導入を繰り返し試みたが、今のところ成功裏には至っていない。今後は、ベクターの変更を視野に入れて検討を行う予定である。3)リンパ球などの浮遊細胞への遺伝子導入の不確実性に鑑み、樹状細胞へのトランスフェクトを計画した。すなわち、脾臓浮遊細胞から樹状細胞を抽出し、上記法に基づいての遺伝子導入を現在試みている。

1）到目前为止，唯一建立的心肌炎T细胞系是通过CM2肽的抗原刺激获得的散装培养基菌株。因此，有必要以均质化为目标，即细胞系作为靶基因的载体的克隆。因此，我们首先尝试基于串行稀释法克隆细胞系。但是，在需要反复抗原刺激的同时，发现细胞系很容易降低发展心肌炎的能力，因此放弃了使用相同方法的克隆。 2）将小鼠IL-10基因成功引入逆转录病毒载体（PLEGFP-N1，Clontech）。该载体很容易被转染到依附细胞（例如NIH3T3）中，并证实它表达了靶蛋白。但是，将最终目标转染到导致CM2特异性心肌炎的T细胞系非常困难，并且反复尝试通过（1）（1）缓慢离心，（2）共培养和（3）病毒产生的纯化，但是到目前为止，无法取得成功。将来，我们计划考虑更改向量。 3）鉴于基因转移到浮动细胞（例如淋巴细胞）中的不确定性，计划转染到树突状细胞中。也就是说，树突状细胞是从浮动脾细胞中提取的，目前正在基于上述方法尝试基因转移。