新規癌関連遺伝子Human Headcaseの発癌および癌進展における分子機構解析

新型癌症相关基因Human Headcase在癌发生和进展中的分子机制分析

• 批准号: 14770229
• 负责人: 牧野 直彦
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770229/
• 关键词: 新規癌関連遺伝子; Human Headcase; 腫瘍血管新生; 発癌メカニズム; hHDC

Drosophila melanogasterにおいて形態形成および細胞分化に関与するheadcase geneのヒトホモログであるHuman headcase gene (hHDC)の解析を行った。1:hHDCの各種消化器癌標本における解析hHDCの各種消化器癌における遺伝子変異および発現低下に関する解析のため、各種消化器癌の凍結標本およびホルマリン固定標本からのDNA、RNAの抽出を行った。DNA検体ではhHDCの遺伝子変異を検索するため、open reading frameを中心に300〜400塩基対の各セグメント毎にPCRを施行し、PCR産物からのシークエンス解析を行った。この解析によりhHDCのexon部分にpolymorphismを確認したが、アミノ酸配列には影響を与えないものであった。高頻度の遺伝子変異は認められなかった。しかし、メチル化特異的PCR解析によるhHDCプロモーター領域のメチル化検索では、複数のメチル化部分が明らかとなり、各種消化器癌における頻度の高いメチル化が認められ、エピジェネティックな変化を確認した。RNA検体ではRT-PCRを施行し、発現状態の解析を進めている。肝臓癌、大腸癌、胃癌の検体において発現低下の傾向が認められ、hHDCと腫瘍血管新生との関与が推測される結果となった。2:hHDC発現実験完全長hHDC cDNAを組み込んだ発現ベクターを作成した。また、各種消化器癌培養細胞においてDNA、RNAの抽出を施行し、hHDC遺伝子変異の有無をPCR産物からのシークエンス解析により行い、発現減弱、消失の有無はRT-PCRにて検索し、感染実験に備えた培養細胞株の背景を解析した。

在果蝇中，我们分析了人类头壳基因（HHDC），它是一种头壳基因人本垒打，该基因与形式形成和细胞分化有关。 1：HHDC中各种消化癌标本的分析，以分析HHDC，DNA和RNA的各种消化癌的遗传突变和减少，从各种消化癌和福尔马林固定标本中提取。为了在HHDC中搜索基因突变，每300至400个基本对段，主要是开放式阅读框，并从PCR产物进行了序列分析，通过PCR进行DNA样品。该分析证实了HHDC外显子部分的多态性，但不影响氨基酸序列。未观察到频率基因突变。然而，通过甲基化特异性PCR分析在HHDC启动子区域进行甲基化搜索显示了多个甲基化部分，并且观察到了各种消化癌的频繁甲基化，并确认了表观遗传变化。 RNA样品被执行RT-PCR以分析表达状态。估计了肝癌，结直肠癌和胃癌样本中表达下降的趋势，并估计了HHDC和新的肿瘤血管的参与。 2：创建了HHDC表达实验实验，并掺入HHDC cDNA。另外，DNA和RNA在各种消化癌培养细胞中提取DNA和RNA，并且通过PCR产物进行HHDC基因突变的存在或不存在，并且RT-PCR搜索了表达恶化和消失分析了培养的细胞库存的背景，以准备制备。