新規非膜系オルガネラcentriolar satellitesの構造・機能解析

新型非膜细胞器中心粒卫星的结构和功能分析

• 批准号: 14770047
• 负责人: 久保 亮治
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770047/
• 关键词: PCM-1; 中心体; 微小管; Centriolar satellites; 細胞生物学

1.PCM-1のドミナントネガティブ変異体によるcentriolar satellitesの機能・構造解析PCM-1蛋白はcentriolar satellitesのscaffold proteinであることをこれまでの研究で示してきた。今回PCM-1蛋白同士の結合を担う部位を同定した。このPCM-1同士の結合を担う部分のペプチドを細胞に高発現させるとcentriolar satellitesを分解する事ができた。このペプチドによりendogenousなPCM-1同士の結合が阻害される事でcentriolar satellitesが分解すると考えられる。Centriolar satellitesが分解された細胞はPCM-1をRNAiによりknock-downした細胞とほぼ同じphenotype(中心体のpericentrin量の減少、細胞周期停止)を示した。これらの結果から、PCM-1蛋白がcentriolar satellitesという構造を取ることが、その機能発現に必須であることが示された。2.ツーハイブリ法によるPCM-1結合蛋白の探索PCM-1蛋白の各ドメインをbaitとしてツーハイブリ法を行い、PCM-1結合蛋白を探索した。いくつかのcandidateについて、タグをつけて細胞に発現させ、その局在を検討した。また、可能性のあるものについて抗体を作成し、細胞内局在およびPCM-1との結合を検討中である。

1。通过PCM-1的主要负突变体对中心卫星的功能和结构分析先前的研究表明，PCM-1蛋白是中心卫星的脚手架蛋白。在本文中，我们确定了负责在PCM-1蛋白之间结合的位点。当在细胞中高度表达负责PCM-1之间结合的肽时，可以降解中心卫星。该肽抑制内源性PCM-1之间的结合，后者降解中心卫星。具有降解的中心卫星的细胞显示出与用RNAi击倒PCM-1的细胞，几乎相同的表型（中心体丁香蛋白含量减少，细胞周期停滞）。这些结果表明，称为中心卫星的PCM-1蛋白的结构对于它们的功能表达至关重要。 2。通过两种杂交方法搜索PCM-1结合蛋白，使用两个杂交方法使用PCM-1蛋白作为诱饵来搜索PCM-1结合蛋白。在带有标签的细胞中表达了几个候选物，并检查了其定位。另外，已经准备了用于潜在项目的抗体，并且正在研究细胞内定位和与PCM-1的结合。

项目成果

Akiharu Kubo, H.Sasaki, A.Yuba-Kubo, S.Tsukita, N.Shiina: "Centriolar satellites : molecular characterization, ATP-dependent movement toward centrioles and possible involvement in ciliogenesis"Journal of Cell Biology. 147巻、5号. 969-980 (1999)

Akiharu Kubo、H.Sasaki、A.Yuba-Kubo、S.Tsukita、N.Shiina：“中心粒卫星：分子特征、ATP 依赖性向中心粒的运动以及可能参与纤毛发生”《细胞生物学杂志》第 147 卷，第 5 期。 .969-980 (1999)

Akiharu Kubo, H.Sasaki, A.YubaKubo, S.Tsukita, N.Shiina: "Centriolar satellites : molecular characterization, ATP-dependent movement toward centrioles and possible involvement in ciliogenesis"Journal of Cell Biology. 147巻、5号. 969-980 (1999)

Akiharu Kubo、H.Sasaki、A.YubaKubo、S.Tsukita、N.Shiina：“中心粒卫星：分子特征、向中心粒的 ATP 依赖性运动以及纤毛发生的可能参与”《细胞生物学杂志》，第 147 卷，第 5 期。 . 969 -980 (1999)

Akiharu Kubo, Shoichiro Tsukita: "Non-membranous granular organelle consisting of PCM-1 : subcellular distribution and cell-cycle-dependent assembly/disassembly"Journal of Cell Science. 116巻、5号. 919-928 (2003)

Akiharu Kubo、Shoichiro Tsukita：“由 PCM-1 组成的非膜颗粒细胞器：亚细胞分布和细胞周期依赖性组装/分解”《细胞科学杂志》第 116 卷，第 5 期。919-928 (2003)。