バベシア・カバリ原虫のワクチン開発に関する研究:感染防御および伝播阻止抗原の探索

豚鼠巴贝斯虫寄生虫疫苗开发研究：寻找预防感染和抑制传播的抗原

基本信息

批准号：
14760193
负责人：
筏井宏実
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はBabesia caballi感染症に対して本原虫の生活史を総合的に鑑み、ワクチン開発および実用化することを最終目的として行われた。以下に本研究成果の概要を述べる。1.赤血球侵入課程における高発現蛋白質に対する新規特異的モノクローナル抗体作製を行ない、その蛋白質をコードするB.caballi原虫新規遺伝子配列を決定した。それらはシャペロン蛋白質(Protein Disulfide Isomerase(PDI)およびImmunooglobulin Binding Protein(BiP))であった。得られたB.caballiおよびBiP抗体および遺伝子を用いて共焦点レーザー顕微鏡による観察と大腸菌およびバキュロウイルス発現系での解析を行なった結果、B.caballi PDIおよびBiPは宿主免疫回避機構としての表面抗原変異、細胞侵入時における接着因子の活性化、さらに抗原虫薬の標的蛋白質としても重要である事が示唆された(投稿中)。2.分子レベルでの解析を行なうためB.caballi1の染色体解析を行ない、染色体分離条件、染色体数およびゲノム長を明らかにした(業績4番目)。3.Lactoferrin(LF)を用いた増殖機構解析を行ない、apo-LFがB.caballiの増殖を強く抑制する事を明らかにした(業績:5番目)。4.B.caballi生活史において重要な増殖の場であるマダニ体内における動態観察のため、B.caballi感染マダニ作出を実験的に行ない、原虫の動態観察を行なった(投稿準備中)。5.in vivoにおいてそれら性状解析を行なうため、同属のB.gibsoni原虫における迅速高感度簡易診断法の確立および新規感染経路を明らかにすると共に、慢性感染時における宿主動物の病態解析および新規治療薬に対するその可能性および応答を明らかにした(業績:1-3番目)。

本研究的最终目的是通过综合考虑巴贝虫感染的生活史，开发并实用化巴贝虫感染疫苗。以下是本研究结果的概述。 1. 我们针对红细胞侵袭过程中高表达的蛋白质创建了一种新的特异性单克隆抗体，并确定了编码该蛋白质的新 B.caballi 原生动物基因的序列。它们是伴侣蛋白（蛋白质二硫键异构酶（PDI）和免疫球蛋白结合蛋白（BiP））。使用获得的 B.caballi 和 BiP 抗体和基因，我们使用共聚焦激光显微镜观察它们，并使用大肠杆菌和杆状病毒表达系统对其进行分析。结果，我们发现 B.caballi PDI 和 BiP 是充当表面抗原。有人认为它对于细胞侵袭过程中粘附因子的突变、激活以及作为抗原虫药物的靶蛋白很重要（目前已提交）。 2. 为了在分子水平上进行分析，我们对B.caballi1进行了染色体分析，明确了染色体分离条件、染色体数目和基因组长度（第4成果）。 3. 我们利用乳铁蛋白（LF）分析其增殖机制，发现apo-LF强烈抑制B.caballi的增殖（成果：No.5）。 4. 为了观察蜱虫体内的动态，蜱虫是B.caballi生活史中的重要繁殖场所，我们实验性地制作了感染B.caballi的蜱虫，并观察了寄生虫的动态（为提交做准备）。 5. 为了分析它们的体内特性，我们将建立一种快速、高灵敏度的同属B.gibsoni寄生虫的简单诊断方法，明确新的感染途径，并分析宿主动物在感染过程中的病理状况。慢性感染并开发新的治疗药物阐明了其潜力和反应（成果：1-3）。