膀胱機能と血流に関する研究

膀胱功能和血流研究

基本信息

批准号：
14704041
负责人：
齊藤源顕
金额：
$ 8.9万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

8週齢の雄Wistarラットの大動脈分岐部直上を血管クリップでクランプし、これをはずすことで膀胱の虚血-再灌流モデルを作製した。ラット膀胱の虚血時間を30分とし、様々な再潅流時間で膀胱を摘出した。この膀胱を用いて、恒温槽を用いた機能実験(カルバコール、KC1に対する反応)および、H&E染色、TUNEL染色を行った。一酸化窒素合成酵素(NOS)阻害剤の作用を調べるため、L-NAME30mg/kgを虚血30分前に腹腔内投与する群を作成し、同様の実験を行った。各群の摘出した膀胱頂部の筋切片を作成し、恒温槽を用いてカルバコールに対する反応を調べた。機能実験では虚血時間を30分に設定すると再灌流30分にてその傷害は増強されたが、この障害はL-NAMEで予防できた。再灌流3日で膀胱収縮力は改善し、7日後は膀胱平滑筋の障害は再灌流30分に比べ優位に回復したがNO合成阻害剤の投与のよりコントロールのレベルまで回復した。TUNEL陽性細胞は虚血-再潅流3日後にもっとも多く観察された。このアポトーシスの誘導は、L-NAMEにて阻害された。ラット膀胱、前立腺の虚血時間を30分、再潅流時間を0、30、60分、1日、7週間とし、それぞれの時間で膀胱、前立腺を摘出した。虚血時間30分、再潅流時間60分の群の作成時にレーザードップラー血流計を用いて前立腺の血流を測定した。各群の摘出した膀胱、前立腺のHSP70-1/-2mRNAの発現をリアルタイムPCR法を用いて定量した。また、HSP70の蛋白レベルでの発現をELISA法で定量した。ラット膀胱、前立腺の血流量は虚血をかけると約10%まで低下したが、再還流でほぼコントロールのレベルまで戻った。HSP70-1/-2のmRNAの発現は、それぞれ虚血時より有意に増加し再還流60分まで高値をとった。またHSP70の蛋白レベルでの発現は、mRNAの発現に少し遅れて増加した。再還流30,60分後に有意に上昇した。本実験からHSP70の発現は、膀胱、前立腺の虚血-再還流障害より遅れて上昇するが、比較的早期にコントロールレベルに戻ることが示唆された。

通过将主动脉分叉夹在主动脉分叉上方的8周大的雄性Wistar大鼠的主动脉分叉上方的主动脉分叉中，创建了膀胱缺血 - 重新灌注模型，该模型具有血管夹和未拧下的雄性Wistar大鼠。膀胱在各种再灌注时间被清除，大鼠膀胱的缺血为30分钟。该膀胱用于使用恒温浴以及H＆E染色和TUNEL染色进行功能实验（对Carbachol和KC1的反应）。为了研究一氧化氮合酶（NOS）抑制剂的作用，在制备缺血前30分钟内对L-NAME 30 mg/kg进行了L-NAME 30 mg/kg，并进行了类似的实验。制作了每组切除的顶点的肌肉切片，并使用恒温浴对卡巴乔尔的反应进行了检查。在功能实验中，将缺血时间设置为30分钟，增加了再灌注30分钟时的损伤，但是可以使用L-NAME预防这种疾病。再灌注3天后，膀胱收缩力提高了，在7天后，膀胱平滑肌疾病恢复到了更高水平，而再灌注30分钟，但在没有合成抑制剂时，膀胱平滑肌疾病恢复到了更高的控制水平。在缺血再灌注3天后，最观察到TUNEL阳性细胞。 L-名称抑制了凋亡的这种诱导。大鼠膀胱和前列腺的缺血时间为30分钟，再灌注时间为0、30、60分钟，1天和7周，并且每次去除膀胱和前列腺。使用激光多普勒血流量计测量前列腺血流，当时缺血时间为30分钟，再灌注时间为60分钟。使用实时PCR对每组切除的膀胱和前列腺中HSP70-1/-2 mRNA的表达进行了定量。此外，通过ELISA定量HSP70在蛋白质水平上的表达。缺血后，大鼠膀胱和前列腺的血流降至约10％，但重新反转恢复到几乎控制水平。与缺血时间相比，HSP70-1/-2的mRNA的表达显着增加，并且重新反复的水平升高至60分钟。此外，蛋白质水平上Hsp70的表达比mRNA表达略晚。 30,60分钟后，回流显着增加。该实验表明，HSP70的表达比膀胱和前列腺缺血 - 反转损伤晚，但相对较早地恢复到控制水平。