神経上皮型幹細胞のドーパミン作動性神経細胞への分化誘導とパーキンソン病脳への移植

神经上皮干细胞诱导分化为多巴胺能神经元并移植到帕金森病脑中

• 批准号: 14770720
• 负责人: 金井 隆一
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770720/
• 关键词: neuroepithelial stem cells; neural transplantation; functional effect; maturation; neuroepithelial stem cell; Sonic hedgehog; FGF8; bFGF responsive neurosphere; transplantation

(1)胎齢10.5日ラット中脳胞部神経板由来神経上皮型幹細胞を神経移植ドナーとしたパーキンソン病モデルラットへの脳内移植実験では、アンフェタミン誘発回転運動は移植後経時的に減少する傾向を認め、移植8週後にはほぼ回転運動がなくなり、障害神経機能の改善を認めた。また、培養液(DMEM)のみを注入した対照群と比べ、移植4週後より統計学的有意差を認めていた。神経上皮型幹細胞の移植片は損傷脳内でも長期に渡り生着は良好であり、移植8週後でもその存在が確認された。免疫組織化学的検討では、移植片内に多数のHu陽性である神経細胞を認めた。その一部はtyrosine hydroxylase(TH)陽性であり、移植後早期である移植2週後より多数存在していた。このTH陽性細胞は、移植2週後では神経突起が短い未熟な細胞であったが、ほぼ完全な神経機能回復を示す移植8週後には大きな細胞体と長い神経突起をもつ成熟した形態を示していた。以上より、神経上皮型幹細胞移植による神経機能回復には、ドナー由来TH陽性細胞数と成熟度が関与する可能性が示唆された。(2)胎齢10.5日ラット中脳胞部神経板由来FGF-2反応性neurosphereに対し、Sonic hedgehog(Shh》およびFGF-8添加等の人為的修飾により、TH陽性細胞への効率的な分化誘導が可能であるか、免疫組織化学的検討を行ったが、現在の処、神経栄養因子添加群と血清添加群との間にTH発現に関して明らかな有意差を認めていない。細胞栄養因子の種類や添加時期、添加量等、少ない修飾操作にて神経上皮型幹細胞をTH陽性細胞へ最も効率的に分化誘導することが可能な培養条件の検討が必要である。

（1）使用神经移植供体作为神经移植供体的神经神经板上衍生自神经神经板的神经上皮干细胞大鼠的大鼠大鼠大鼠的脑内内移植实验，表明，植入后的8周，植入后的8周，植入后的8周倾向于减少旋转的旋转运动。此外，与对照组相比，观察到统计学上的显着差异，其中仅在植入后4周注射培养基（DMEM）。很长一段时间内，神经上皮干细胞移植物很好地植入了受伤的大脑中，即使经过8周的植入，它们的存在也得到了证实。免疫组织化学研究表明，移植物中有大量的HU阳性神经元。其中一些是酪氨酸羟化酶（Th）阳性，并且从植入后2周起就大量存在，这是植入后早期的。这些th阳性细胞是植入后两周后两周内具有短神经突的未成熟细胞，但植入后八周表现出具有大细胞体和长神经突的成熟形态，几乎显示出几乎完全的神经功能恢复。从以上提出，供体衍生的th阳性细胞的数量和成熟度可能与神经上皮干细胞移植的神经功能恢复有关。 （2）进行了一项免疫组织化学研究，以确定人工修饰（例如声波刺猬（SHH）和FGF-8）是否可以通过人为地添加Sonic HedgeHog（SHH）和FGF-8来诱导有效分化为Th阳性细胞，但在表达组中却没有明显的差异。有必要检查培养条件，使神经上皮干细胞通过小的修饰程序（例如胞营养因子的类型，时机和添加量）最有效地分化为TH阳性细胞。