男性不妊の新マウスモデルを用いての、不妊症の免疫調節療法の開発

使用新的男性不育小鼠模型开发不育症免疫调节疗法

• 批准号: 02670711
• 负责人: 北条 憲二
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kagawa Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670711/
• 关键词: 不妊症治療; サプレッサ-T細胞株; 抑制性T細胞因子; マウス; 実験的自己免疫性精巣炎; 精子免疫

我々は同系精巣細胞(TC)の2、3回の皮下注射のみで、アジュバントその他の免疫増強操作なしに、マウスに実験的自己免疫性精巣炎(EAO)をきわめて高率に発症させることをみいだした。この実験系を免疫制御の検定系に用いて、男性不妊症の免疫調節療法の開発に努力してきたが、本年度に得られた成果は、次のごとくである。1.上記の新しいEAOモデルをその前臨床期(preclinical phase)において抑制する能力をもつT細胞株の樹立に成功した。正常C3H/He系雄マウス(生後8週齢)に1x10^8個の同系TCを2週間隔で10回皮下注射を反復し、最終感作より7日後に摘出した脾より得たリンパ球をマウス可溶性精巣抗原(mTA,300μg/ml)とシクロスポリン(250ng/ml)の存在下で7日間培養し、その後rILー2で維持するstarve phaseと30Gy照射同系脾細胞とmTA(100μg/ml)と共に培養する'feed'phaseとの交互反復によりmTA特異的細胞株を選択した。樹立された細胞株(CTs)の表面形質はThy1.2^+,CD4^+,CD8^ー,CD3^+,slg^ーであり、in vitroリンパ球増殖性応答ではmTA刺激に対し有意の反応性を示した。本株化細胞の養子移入の実験では、EAOのinductive phaseまたはclinical phaseに移入しても発症抑制効果はみられなかったが、preclinical phaseに移入した場合には完全に病気の発症を抑制することができた。また、この細胞株の抑制効果は'feed'phaseにある株にのみ認められた事実から、抑制効果の発現には特異抗原刺激による細胞活性化が必須であることが明らかとなった(Proc.5th Ann.Meeting Jap.Soc.Basic Reprod.Immunol.1991)。現在、千葉大学医学部附属高次機能制御研究センタ-免疫機能分野・谷口克教授との共同研究の下に、本CTs細胞のT細胞レセプタ-に関する分子生物学的研究が進行中である。2.昨年度の研究で新しいEAOモデルをその誘導期において阻止する能力のあるCD8^+サプレッサ-T細胞を誘導できる実験系を確立したが、現在、この系で働く抑制性T細胞因子産生性サプレッサ-細胞の株化に、引続き努力中である。

我们发现，在没有佐剂或其他免疫增强操作的情况下，仅皮下注射几次同源睾丸细胞（TC），就会引起小鼠实验性自身免疫性睾丸炎（EAO）的高发病率。利用该实验系统作为免疫调节的检测系统，致力于开发针对男性不育症的免疫调节疗法，今年取得的结果如下。 1.我们在临床前阶段成功建立了具有抑制上述新EAO模型能力的T细胞系。正常C3H/He品系雄性小鼠(8周龄)每2周皮下注射1x10^8同种TCs 10次，最后一次致敏后7天取出脾脏取出淋巴细胞，在饥饿培养箱中培养7天。存在小鼠可溶性睾丸抗原（mTA，300 μg/ml）和环孢菌素（250 ng/ml），然后用 rIL-2 维持。通过用 30 Gy 照射的同基因脾细胞和 mTA (100 μg/ml) 交替培养的阶段和“补料”阶段来选择 mTA 特异性细胞系。建立的细胞系（CT）的表面特征为Thy1.2^+、CD4^+、CD8^-、CD3^+和slg^-，体外淋巴增殖反应显示出对mTA It刺激的显着反应。表现出反应性。在该细胞系的过继转移实验中，即使转移到EAO的诱导期或临床期，也没有观察到抑制疾病发作的效果，但当转移到临床前阶段时，完全抑制了疾病的发作。 。此外，仅在“喂养”阶段的菌株中观察到该细胞系的抑制作用这一事实表明，通过特异性抗原刺激的细胞活化对于抑制作用的表达是必需的（Proc. 5th Ann.Meeting Jap. Soc.Basic Reprod.Immunol.1991）。目前，与千叶大学医学院高级功能控制研究中心免疫学系的 Masaru Taniguchi 教授合作，正在进行 CT 细胞 T 细胞受体的分子生物学研究。 2.在去年的研究中，我们建立了一个实验体系，可以诱导CD8^+抑制性T细胞具有抑制新EAO模型处于滞后期的能力，目前我们还没有开发出产生抑制性T细胞因子的细胞在该系统中起作用的抑制器 -我们正在继续努力开发细胞系。