肉腫組織・細胞の進展、転移における細胞外マトリックス分子の作用に関する研究

细胞外基质分子对肉瘤组织细胞进展和转移影响的研究

• 批准号: 13770790
• 负责人: 西田 佳弘
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770790/
• 关键词: ヒアルロン酸; ヒアルロン酸合成酵素; 骨肉腫; 抗腫瘍効果; 競合的・定量的RT-PCR; アンタイセンス; 脂肪肉腫; ヒアルロン酸結合タンパク; 免疫組織染色

骨肉腫細胞株におけるヒアルロン酸合成酵素の制御による抗腫瘍効果1)骨肉腫細胞株におけるヒアルロン酸合成酵素発現量解析骨肉腫細胞株MG63とHOSを単層培養し、total RNAを抽出し、3種のヒアルロン酸合成酵素(HAS-1、HAS-2、HAS-3)のmRNA発現量を競合的、定量的RT-PCRにより算出した。HOSはいずれのHASの発現量も低値を示したが、MG63においてはHAS-2の発現量が有意に多く、ヒアルロン酸合成の中心的役割を担うことが示唆された。2)MG63に対するアンタイセンスHAS-2投与によるヒアルロン酸合成の抑制アンタイセンスHAS-2はMG63に対しておよそ60%のmRNA発現抑制効果を示した。それに伴い、MG63細胞周囲および細胞内に染色されるヒアルロン酸の濃度も低下した。またヒアルロン酸発現の低下と同様に細胞周囲マトリックス形成も抑制された。3)MG-63に対するアンタイセンスHAS-2投与による抗腫瘍効果炭層培養したMG-63に対してアンタイセンスHAS-2を投与すると細胞増殖能が低下した(MTT assay)。またマトリゲルを用いたinvasion assayにおいてもアンタイセンスHAS-2投与群は細胞浸潤能が低く、HAS-2の腫瘍増殖・浸潤における重要な役割が示唆された。4)インフォームドコンセント骨肉腫患者に対して、あらかじめ研究に関して説明し、内容について理解していただいた。5)骨肉腫組織におけるHASの発現生検時、手術時採取した骨肉腫組織を液体窒素にて急速凍結し、-80℃で保管した。この組織から常法通りtotal RNAを抽出し、それぞれの骨肉腫組織で発現するHASのmRNA量を競合的・定量的RT-PCRにより解析したところ個々の骨肉腫によってHASの発現パターンが異なっており、制御するべきHASは腫瘍ごとに異なることが推測された。

调节骨肉瘤细胞系中透明质酸合酶的抗肿瘤作用 1）骨肉瘤细胞系中透明质酸合酶表达水平分析 将骨肉瘤细胞系 MG63 和 HOS 单层培养，提取总 RNA，分析 3 种透明质酸的 mRNA 表达水平通过竞争性定量 RT-PCR 计算合成酶（HAS-1、HAS-2、HAS-3）。尽管HOS中所有HAS的表达水平较低，但MG63中HAS-2的表达水平明显较高，表明其在透明质酸合成中发挥核心作用。 2)通过给予针对MG63的反义HAS-2来抑制透明质酸合成反义HAS-2对MG63上的mRNA表达显示出约60％的抑制效果。与此同时，MG63 细胞周围和内部染色的透明质酸浓度也下降。此外，细胞周基质的形成以及透明质酸的表达也受到抑制。 3)给予反义HAS-2对MG-63的抗肿瘤作用当对煤层培养的MG-63给予反义HAS-2时，细胞增殖能力下降(MTT测定)。此外，在使用Matrigel的侵袭测定中，反义HAS-2给药组的细胞浸润能力较低，表明HAS-2在肿瘤生长和侵袭中发挥重要作用。 4）知情同意本研究提前向骨肉瘤患者进行解释，使其了解内容。 5)HAS在骨肉瘤组织中的表达将活检和手术期间收集的骨肉瘤组织快速冷冻在液氮中并保存在-80℃。使用常规方法从该组织中提取总RNA，并通过竞争性定量RT-PCR分析各骨肉瘤组织中HAS mRNA的表达量，发现HAS的表达模式根据个体骨肉瘤而不同。据推测，应控制的HAS因肿瘤而异。

项目成果

Hideshi Sugiura, Mitsuru Takahashi, Hirohisa Katagiri, Yoshihiro Nishida, Hiroatsu Nakashima, Masahiro Yonekawa, Hisashi Iwata.: "Additional wide resection of malignant soft tissue tumors"Clin Orthop. 394. 201-210 (2002)

Hideshi Sugiura、Mitsuru Takahashi、Hirohisa Katagiri、Yoshihiro Nishida、Hiroatsu Nakashima、Masahiro Yonekawa、Hisashi Iwata.：“恶性软组织肿瘤的附加广泛切除”Clin Orthop。

Yoshihiro Nishida, Cheryl B Knudson, Warren Knudson.: "Extracellular matrix recovery by human articular chondrocytes after treatment of hyaluronan hexasaccharides or Streptomyces hyaluronidase"Mod. Rheum.. (In press). (2002)

Yoshihiro Nishida、Cheryl B Knudson、Warren Knudson：“透明质酸六糖或链霉菌透明质酸酶处理后人关节软骨细胞的细胞外基质恢复”Mod。

Hiroatsu Nakashima, Hirohisa Katagiri, Hideshi Sugiura, Masahiro Yonekawa, Yoshihiro Nishida, Yoshihisa Yamada: "Epithelioid sarcoma mimicking a primary osseous multifocal scapula lesion"Skeletal Rad. 31. 430-433 (2002)

Hiroatsu Nakashima、Hirohisa Katagiri、Hideshi Sugiura、Masahiro Yonekawa、Yoshihiro Nishida、Yoshihisa Yamada：“模仿原发性骨性多灶性肩胛骨病变的上皮样肉瘤”骨骼 Rad。